[發明專利]一種利用正常人多種皮膚細胞篩查皮膚抗氧化劑安全和功效的方法

有效

• 申請號: 201310176059.1
• 申請日: 2013-05-13
• 公開（公告）號: CN103320490A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 程樹軍;秦瑤;步犁;談偉君
• 申請（專利權）人: 程樹軍;廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 周克佑

技術領域

本發明屬于個人皮膚護理用品抗氧化性安全功效評價和分析檢測技術領域，具體涉及一種利用正常人多種皮膚細胞篩查（screen）皮膚疑似抗氧化劑安全和功效的方法。?

背景技術

皮膚是人體最大的器官，是外源化學因素（化學品、藥品、化妝品等）或物理機械因素（紫外線、微波等）毒性作用的主要器官。隨著現代工業的發展，環境污染日益嚴重，日常生活中皮膚接觸的氧化應激源的種類和頻率較之前有大幅增加。各種不同來源的氧化應激源對皮膚細胞及其蛋白、細胞脂質甚至DNA產生攻擊，造成細胞氧化損傷，直接或間接的導致各種皮膚亞健康和皮膚病理反應的出現，如加速皮膚衰老過程，加速色素沉著，加劇紫外線引起的損傷，使皮膚創傷難以愈合。此外，皮膚氧化應激還與紅斑狼瘡、變應性皮膚疾病、銀屑病等密切相關。?

皮膚抗氧化成為皮膚科治療藥品和護膚化妝產品研究的熱點，市場上出現很多宣稱可以清除氧化自由基，延緩皮膚衰老的產品，但對其是否能達到宣稱的效果至今尚無標準化的評價體系，這不僅為消費者辨別產品質量的好壞設立了障礙，也使檢測機構對化妝品市場的監管造成一定困難。而建立標準化的細胞氧化損傷快速檢測體系和方法有利于對化學物或化妝品的功效進行評價。?

利用適宜的生物學系統（細胞、動物或人體組織）進行皮膚毒性檢測和功效測試是化妝品、藥品、食品添加劑及原料、農藥、生物制品、化學品健康安全評價的常規檢測項目。傳統的皮膚安全性評價實驗常用動物進行，不僅試驗周期長，成本高，會給動物造成極大的痛苦，而且鑒于動物皮膚結構功能與人皮膚有的差異，動物試驗的結果與人的相關性較差。近20年來，化妝品和個人護理產品的皮膚安全和效果測試逐漸轉向不再以動物模式為基礎的毒理學系統進行，例如來源于正常人的皮膚細胞或組織，或利用人的皮膚細胞體外重建的皮膚模型。?

傳統的皮膚氧化效果測試可分為化學法、動物模型和人體試驗三類。化學檢測法主要針對應激過程中起關鍵作用的自由基，把檢測自由基水平的降低或清除自由基的能力作為抗氧化功效的證據，這些抗氧化劑的化學檢測方法通常以易于氧化的底物為測試系統，加入氧化物質發生化學反應形成氧化產物（如各種活性氧和自由基），然后加入抗氧化劑檢測其自由基清除能力作為判斷依據。例如自由基清除能力測試（DPPH）是一種化學方法，測試體系由DPPH與抗氧化劑混合，30min孵育后比較吸光度，以DPPH去色百分比表示抗氧化劑自由基的清除效率（Thaiponga?K,Boonprakoba?U,Crosby?K,et?al.Comparison?of?ABTS,DPPH,FRAP,and?ORAC?assays?for?estimating?antioxidant?activity?from?guava?fruit?extracts,Journal?of?Food?Composition?and?Analysis,2006,19:669-675）。化學檢測法是在實驗室人工模擬環境中進行，反應體系單一，依賴反應體系中化學反應產生的自由基類型分別測定鐵金屬離子清除活性（FRAP）、過氧化氫清除活性、超氧陰離子自由基清除活性，受底物的限制不可能同時檢測多種氧化損傷效應，從而也不可能從總體上定量抗氧化劑的效果。由于不涉及活的生物體系，化學測試結果與體內實際應用效果存在差異。?

傳統動物模式的抗氧化試驗主要用于皮膚疾病發病機制和藥物治療的研究，以闡明氧化損傷與疾病的關系。局部氧化損傷動物模型多采用紫外線照射，如UVB照射可造成皮膚老化和紫外線損傷；也可采用皮膚直接涂抹化學物質，如不同濃度的變應原二硝基氯苯造成變應性皮膚炎癥；也有的采用腹腔注射黃嘌呤氧化酶加次黃嘌呤造成氧化應激，或使動物暴露于過高溫度下，或造成局部皮瓣缺血。這些模型易造成動物較大痛苦和情緒應激，而且動物皮膚與人體皮膚差異太大，試驗結果可信度不高。現在這些模型已很少用于化妝品的抗氧化功效測試過程。?

皮膚抗氧化與保濕、光損傷、老化密切相關，基于志愿者的抗氧化產品功效試驗方法主要用于終產品的評價，通過試用產品后總體皮膚功能改善情況綜合反應產品抗氧化的性能，其優點表現在能夠在宏觀的水平監測皮膚氧化的結果，缺點是特異性不強。?

當前，各種功能性化妝品已成為人們日常生活必需品，在滿足消費者改善膚質愿望的過程中，也給消費者帶來了精神上的愉悅。越來越多的來源于合成化工產品、天然動植物提取物、生物活性因子等被開發利用為抗氧化物質，同時，也應注意到各種具有抗氧化功效的化學物質的廣泛使用可能給消費者帶來一定程度的潛在健康風險，而建立一種既安全、高效又人道（既替代動物實驗）的毒性和功效的評估方法則是我們此發明中所解決的問題。?