[發明專利]人跨膜型TNF-α單克隆抗體及其臨床應用

在審

• 申請號: 201310173989.1
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN104140466A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 李卓婭;喻明霞;周曉曦;王晶;尹丙姣;牛麟
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C12N15/13;C12N5/20;C07K19/00;C12N5/10;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/91
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 夏惠忠

技術領域

本發明屬于生物技術與生物藥物領域，涉及發明一種針對人跨膜型腫瘤壞死因子-α（transmembrane?tumor?necrosis?factor-α,tmTNF-α）的單克隆抗體，進一步涉及發明其基因工程抗體，包括嵌合抗體和單鏈抗體，以及包含這些抗體中任一種作為活性成分用于腫瘤的診斷劑與治療劑。?

背景技術

惡性腫瘤已成為危害人類健康的主要疾病，由于傳統手術、化療和放療的療效不盡人意，生物治療作為第4種治療手段，在腫瘤綜合治療中發揮著越來越大的作用。抗體作為治療性藥物已有上百年的歷史。早期主要用抗血清進行抗感染治療。由于其成分太復雜、多變，而且是異源蛋白，在治療時會出現嚴重副作用。1975年單克隆抗體技術問世以來，已有多種針對腫瘤標記的單抗用于靶向性治療腫瘤，并取得很好的療效。例如Rituximab于1997年批準用于治療非霍奇金性淋巴瘤，顯著提高了彌漫大B型淋巴瘤的臨床治愈率^[1-2]。單克隆抗體是近年來年增長率最大的一蛋白類藥物，2001年全球銷售額增長了57.3%，接近30億美元。從抗體藥物的發展速度來看，目前它已成為生物技術藥物中最重要的一大類，也是世界生物工程制藥業的支柱產品之一。?

腫瘤壞死因子-α(tumor?necrosis?factor-α,TNF-α)具有兩種形式：跨膜型TNF-α(transmembrane?TNF-α,tmTNF-α)和分泌型TNF-α(secretory?TNF-α,sTNF-α)。定位于細胞膜上的tmTNF-α，在TNF-α轉換酶(tumor?necrosis?factor-alpha?converting?enzyme,TACE)的作用下，可使其胞外段脫落，成為sTNF-α。盡管TNF-α對部分腫瘤具有殺傷作用，但大量研究證實在許多實體腫瘤中，如乳腺癌、胃癌、結直腸癌、肝癌、肺癌、腎癌、黑色素瘤，淋巴瘤等sTNF-α分泌明顯增加^[3-5]，而腫瘤微環境中的sTNF-α則可促進腫瘤生長、新生血管形成和轉移^[6-7]，因此，sTNF-α作為促炎細胞因子被認為是慢性炎癥惡變的重要橋梁分子之一。故以TNF-α為靶點，將抗TNF抗體用于治療實體瘤被批準進入I期和II期臨床試驗，以治療腎癌、轉移性乳腺癌、以及進展性癌癥等，雖然部分患者受益于抗體治療^[8-10]，但是，血清sTNF-α增高患者常是抗體治療無應答者^[9]。這可能與當前上市抗體既可與sTNF-α結合，又可與tmTNF-α結合有關，因為血清sTNF-α可中和部分抗體，使之到達腫瘤部位的有效劑量減小；此外，腫瘤細胞tmTNF-α被剪切成sTNF-α，喪失腫瘤標記物也是患者?對抗體不應答的重要原因。?

近幾年來，我們對若干不同的腫瘤標本進行檢測，證實：（1）tmTNF-α為多種腫瘤的表面標記物：乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、胃癌、急性淋巴細胞白血病和淋巴瘤等均有部分病例高表達tmTNF-α，但是癌旁組織則不表達;（2）tmTNF-α可能是腫瘤干細胞的標記物：我們初步實驗證實不但部分白血病患者（如急性髓樣白血病，AML）的腫瘤細胞高表達tmTNF-α，而且其白血病干細胞也同樣高表達tmTNF-α，但正常外周血細胞低表達tmTNF-α（<10%）。（3）tmTNF-α明顯促進腫瘤生長、轉移及抵抗凋亡：我們的實驗證實高表達tmTNF-α的乳腺癌細胞和Β淋巴瘤細胞均可通過該膜分子的反向信號，持續性活化NF-κB，導致腫瘤細胞抵抗sTNF-α^[11-12]和化療藥物阿霉素等誘導的凋亡，促進腫瘤生長和轉移。上述實驗證據提示tmTNF-α不但可作為腫瘤標記物，其本身還可促進腫瘤的生長和發展，因而是理想的腫瘤靶向治療的分子靶點。制備以TNF-α膜分子為靶點，且不與分泌型TNF-α發生交叉反應的單克隆抗體，對于治療tmTNF-α陽性腫瘤更為有效，且可能適用于那些對現上市抗體無應答腫瘤患者的治療。[參考文獻：?

1.Friedberg?JW,Vose?JM,Kelly?JL,et?al.The?combination?of?bendamustine,bortezomib?and?rituximab?for?patients?with?relapsed/refractory?indolent?and?mantle?cell?non-Hodgkin?lymphoma.Blood.2011;117:2807-12；?