[發明專利]免疫原性組合物及其使用方法

在審

• 申請號: 201310173837.1
• 申請日: 2006-10-25
• 公開（公告）號: CN103357007A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 唐納德·坦普爾頓·海尼
• 申請（專利權）人: 人工細胞技術公司
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/12;A61K39/02;A61K39/002;A61P31/04;A61P31/10;A61P31/12
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 黃威;王智

本申請是分案申請，原申請的申請日為2006年10月25日、申請號為200680039703.9(PCT/US2006/041666)、發明名稱為“免疫原性組合物及其使用方法”。

相關申請的交叉引用

本申請要求2005年10月25日提交的、申請號為60/729,828的美國臨時申請的優先權，其全文通過引用合并于此。

技術領域

本發明涉及免疫原性組合物和使用該免疫原性組合物誘導脊椎動物產生免疫應答的方法。

背景技術

人們發現，對于某些疾病，機體先與免疫性感染制劑接觸后，可抵抗以后的感染，自此之后疫苗一直在醫學領域占據重要地位。多年來人們一直使用疫苗使個體產生抗病毒、細菌、真菌和寄生蟲等特定病原體感染的免疫性，而且還使用疫苗刺激機體產生抗癌細胞上抗原或抗病理原纖維形成的免疫應答的能力。疫苗可以通過口服、靜脈內、皮下、透皮、舌下、肌內和鼻內等各種給藥方式使用。

早期疫苗制備依賴于仍然保留免疫原性的“活”或“死”的病原體。隨著對特定病原體結構和功能及適應性免疫機制的深入了解，設計更安全可靠、靶向性更強的疫苗已成為可能。例如，目前使用的抗B型肝炎病毒疫苗僅僅只使用一部分病毒表面抗原接種，而不必使用整個病原體。使用這類疫苗不僅能降低副作用，而且能避免產生針對抗原的無益免疫應答，這種應答是非保護性應答，也就是說，不產生長期免疫力。另外，使用重組DNA技術和基因療法，還研制出DNA疫苗，在有利情況下使機體產生保護性免疫應答。

使用蛋白質抗原（如病毒蛋白或腫瘤特異性抗原）或來源于蛋白質抗原的免疫原性多肽制備疫苗，是一種新型策略，因其毒性低、應用廣泛而有巨大的臨床潛力。但是，使用蛋白質疫苗獲得成功的臨床病例極為有限，部分原因在于該疫苗給藥困難。所以，有必要開發制備工程多肽抗原的更有效方法。

目前正在評估合成肽疫苗抗細菌、寄生蟲和病毒感染的保護功效。細菌表位疫苗包括抗霍亂和志賀氏菌感染的疫苗。瘧疾合成疫苗已經通過I期和II期臨床試驗。流感和B型肝炎代表兩類病毒系統，合成肽疫苗在這兩類系統中的前景尤其看好，而且最近抗人免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的合成疫苗的開發也備受關注。

疫苗中蛋白質或肽抗原刺激產生的有利的免疫應答包括體液介導的和細胞介導的免疫。體液部分涉及經刺激產生抗體的B細胞，而細胞介導的部分包括T淋巴細胞。細胞毒性T-淋巴細胞（CTLs）在細胞介導的免疫系統中發揮重要作用，可以使被病毒或細菌感染的細胞裂解。尤其是CTLs具有細胞表面受體，能識別與MHC-I類或II類分子有關的外來肽。

所以，需要開發適于將多肽等復合抗原釋放到脊椎動物內的方法和專用釋放平臺。免疫原性多肽的工程技術和由免疫原性多肽制成的結構體有望滿足這一需求。最好是，所得免疫原性決定簇的提呈將活化適應性免疫系統的至少某些組成，也就是說，抗原提呈將誘導產生足以抗擊特定抗原的免疫應答，而無論該免疫應答是由抗體、細胞毒性T細胞、輔助性T細胞、天然殺傷細胞或巨噬體，還是由它們的某些組合介導。

發明內容

在一實施例中，免疫原性組合物包括含兩層或兩層以上聚電解質的多層膜，其中，相鄰層含有相反電荷的聚電解質，第一層聚電解質包括抗原性多肽，該抗原性多肽含有與一個或多個抗原決定區共價連接的一個或多個表面吸附區。所述抗原性多肽和一個或多個表面吸附區具有相同的極性。所述一個或多個表面吸附區含有一個或多個氨基酸序列基元（motif），該基元由5-15個氨基酸構成，每個殘基的凈電荷數量大于或等于0.4。所述一個或多個抗原決定區含有3到約250個氨基酸殘基。所述抗原性多肽不是均聚體，有至少15個氨基酸長，pH4-10時水溶解度大于50μg/mL。另外，第二層聚電解質包括分子量大于1,000、每分子至少5個電荷且電荷與第一層多肽相反的聚陽離子材料或聚陰離子材料。

在另一實施例中，誘導脊椎動物產生免疫應答的方法包含給所述脊椎動物給用上述免疫原性組合物。

附圖說明

圖1是帶相反電荷多肽的組裝體示意圖。

圖2是包含一個抗原決定區（3）和兩個表面吸附區（1、2）的抗原性多肽，一個表面吸附區（1）與所述抗原決定區（3）的N-端連接，另一個表面吸附區（2）與所述抗原決定區（3）的C-端連接。

圖3是利用水相合成法、固相合成法或多肽重組法獨立制備的LBL抗原性多肽的三個不同區。

圖4是將抗原性多肽（4）的三個區連在一起的過程。