[發明專利]畜禽用乳源乳酸菌抗菌肽添加劑的生產方法

無效

• 申請號: 201310172283.3
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN103250867A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 高學軍;于微;李慶章;劉營;霍楠;仇友文;袁肖寒;張明輝;郝敬友
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: A23K1/00
• 分類號: A23K1/00;A23K1/16
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 韓末洙

技術領域

本發明涉及一種發酵多種植物飼料蛋白的生產方法。

背景技術

嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌干酪亞種屬于美國FDA公布的42種可直接喂飼的益生菌種。益生菌是一類有益于人體健康的活性微生物食品原料，目前常用的益生菌有嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌兩大類，與干酪乳桿菌一起被稱為健康三益菌。嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌干酪亞種對其宿主營養、免疫、防病等具有顯著的益生功效，越來越成為人們研究、開發、生產的焦點。自1908年Metchnikoff發現乳桿菌能夠抑制腸道中的有害菌后，各國學者陸續發現幾乎乳酸菌的每個屬種的每個種，甚至每一株那能產生乳酸菌素。這些乳酸菌素成為天然肽類防腐劑的一大來源。干酪乳桿菌能夠抑制和殺死食品中的許多腐敗菌及致病菌，并且不影響食物性狀，甚至能夠改善食品特性，因此將其作為發酵劑添加到食品中能使產品更加優質，且對食品儲藏過程中的防腐保鮮也起到積極作用。本研究發現，干酪乳桿菌干酪亞種ATCC334基因組含有2個串聯抗菌肽基因簇(Lac705beta和Lac705alpha)和1個單獨基因(Lactobacillus?curvatus?plasmid?pRC18)，嗜酸乳桿菌CGMCC1·03342含有1個抗菌肽基因(acd?A)，嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌干酪亞種發酵產物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有顯著的抑制作用，能顯著延長鮮奶的保質期。

豬、雞等畜禽易發生消化道疾病，如斷奶仔豬腹瀉、傳染性胃腸炎、雞腸炎、沙門氏菌病等，嚴重影響生產性能，甚至造成死亡。目前，抗生素治療越來越受到限制，發展綠色天然抗菌活性物質己成為預防和治療豬、雞等畜禽消化道疾病的趨勢。乳源乳酸菌抗菌肽具有殺滅胃腸道病原菌，平衡胃腸道菌群，促進消化吸收等功效。目前，國內現有抗菌肽產品在畜牧業應用越來越廣，但現有產品還存在發酵菌種不明確，發酵工藝不穩定等技術問題。篩選有效的產抗菌肽菌種，對產抗菌肽的微生物代謝進行調控，建立適合的發酵工藝，是抗菌肽生產中需解決的重要技術問題。

嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌干酪亞種具有較強的產酸、產香、產粘和拮抗致病菌等能力，通過優化嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌干酪亞種增殖和發酵效果以及低溫干燥，可以去除粕類蛋白中的脲酶、胰蛋白酶抑制因子、植酸、酚類等抗營養因子，提高抗菌肽活性和限制性必需氨基酸含量，降低蛋白質的分子質量，改善適口性并提高消化吸收效率。目前嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌干酪亞種尚很少用于飼料抗菌保健產品生產，其發酵產品對于畜禽消化道疾病防治(制)具有廣闊的市場前景。

發明內容

本發明目的是為了解決現有畜禽用抗菌肽添加劑生產菌種不明確和抗菌肽活性偏低的問題，而提供畜禽用乳源乳酸菌抗菌肽添加劑的生產方法。

本發明畜禽用乳源乳酸菌抗菌肽添加劑的生產方法按下列步驟實現:

一、將凍存的嗜酸乳桿菌菌種和干酪乳桿菌干酪亞種用MRS培養基活化，然后按體積百分含量1%～5%的接種量將嗜酸乳桿菌菌種接種于增殖培養基A中，在35～40°C下發酵35～37h，得到嗜酸乳桿菌增殖培養液，按體積百分含量1%～5%的接種量將干酪乳桿菌干酪亞種接種于增殖培養基B中，在35～40°C下發酵35～37h，得到干酪乳桿菌干酪亞種增殖培養液;其中每升增殖培養基A由25～30g蔗糖、35～40g牛肉膏、5～6gNaCl、10～15gTween-80和余量的蒸餾水制成，pH為5.0;每升增殖培養基B由9～10g蔗糖、25～30g大豆蛋白胨、6～7gNaCl、9～10gTween-80和余量的蒸餾水制成，pH為6.0;

二、將步驟一得到的嗜酸乳桿菌增殖培養液和干酪乳桿菌干酪亞種增殖培養液分別按體積百分含量10%～20%的接種量接種到種子培養基中，在35～40°C下發酵35～37h，得到嗜酸乳桿菌種子培養液和干酪乳桿菌干酪亞種種子培養液，其中每升種子培養基由200～250g干物質，15～20g尿素，35～40g金黃色葡萄球菌熱滅活菌液和余量的蒸餾水制成，干物質曲質量比為2.0～3.0:1的豆粕和玉米蛋白粉組成;

三、分別將步驟二得到的嗜酸乳桿菌種子培養液和干酪乳桿菌干酪亞種種子培養液按體積百分含量5%～20%的接種量接種到發酵培養基中，花35～40°C下發酵45～50h，得到嗜酸乳桿菌發酵產物和干酪乳桿菌干酪亞種發酵產物，其中每升發酵培養基由450～500g的混合粉木和蒸餾水制成，混合粉末由質量比為13:3:3:4的豆粕粉、棉粕粉、菜粕粉和玉米粉組成;