[發明專利]一種腫瘤細胞靶向性穿膜肽

在審

• 申請號: 201310170530.6
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN104140457A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 趙健;王富軍;傅云龍;張濤鑄;單含文;任偉揚;謝先文
• 申請（專利權）人: 浙江日升昌藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;A61K47/42;A61K45/00;A61K49/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 王裕

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種腫瘤細胞靶向性穿膜肽、多核苷酸分子、用途以及含其的靶向給藥系統。

背景技術

細胞膜由脂質雙分子層組成，其內部由疏水性的非極性分子構成。細胞膜是物質進出細胞的一道屏障，許多生物大分子如多肽、蛋白質、DNA是不能自由跨越細胞膜進行物質和信息傳遞的。這一屏障雖然對機體有保護作用，但也使許多有應用前景的藥物被摒棄。

近年來，國外學者在對一些病毒轉染特性的研究中相繼發現了一類蛋白結構域，如：人免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus，HIV-1)的反式轉錄激活因子(TAT)、果蠅艇角同源異形域(ANTP)、單純皰疹病毒I型VP22轉錄因子，不僅具有細胞穿透能力，而且具有介導異源蛋白、寡聚核苷酸、脂質體等大分子直接透過細胞膜進入細胞的功能，將其命名為細胞穿膜肽(cell-penetrating?peptides，CPPs)細，也被稱之為蛋白轉導域(protein?transduction?domain，PTD)，細胞穿膜肽(cell?penetrating?peptides,CPPs)又稱為蛋白轉導域或膜轉導肽,是一種由30個或者更少氨基酸組成的能夠穿透細胞膜的多肽,能夠運載包括藥物在內的許多物質，共有的性質:1)具有凈正電荷性和兩親性;2)穿膜轉運效率高;3)可以導入近乎所有的細胞;4)可以攜帶多種活性物質進入細胞;5)可以通過固相合成或原核表達制備,方法成熟簡便。大量研究表明,CPPs具有強大的運載潛能,CPPs攜帶的物質可以為蛋白質(綠色熒光蛋白、RNA酶、半乳糖苷酶等)、多肽(100個氨基酸殘基以下)、DNA、化學小分子藥物、寡核苷酸(100bp以下)、反義核酸、肽核酸、納米顆粒、熒光素、有機分子、腺病毒載體、成像物質、脂質體及鐵顆粒等，運載能力可以達到120kDa(如半乳糖苷酶)、40nm(如鐵顆粒),沒有明顯的證據表明運載極限。CPPs可以通過化學結合或基因融合等方式攜帶各種生物大分子。CPPs與藥物的連接方式有兩種:非共價連接和共價連接。但CPPs這種非特異性地穿膜特征雖然體現了CPPs在體內應用上的廣泛性，但在實際應用過程中也將導致生物活性藥物給藥量的加大，藥物治療效率的降低，不良反應增加的憂慮。因此，對CPPs穿膜轉運方式的改進不僅在臨床應用上具有非常廣闊的應用前景，而且也具有巨大的經濟價值。

大量研究證實，在大多數常見的腫瘤細胞表面都有表皮生長因子受體（EGFR）過度表達或者突變。EGFR異常高表達的腫瘤包括乳腺癌、肺癌、胃癌、結直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌、腎癌、神經膠質瘤、鼻咽癌、頭頸部鱗狀細胞癌等（Salomon等，Crit?Rev?Oncol?Hematol.1995，19:183）。腫瘤細胞表面EGFR的過度表達以及腫瘤細胞的生長依賴于生長因子的特點使得EGFR成為了目前腫瘤專一性治療研究的一大熱點。EGFR被作為識別腫瘤細胞的專一性導向靶標，大量用于腫瘤專一性治療藥物的開發與研究（Seshacharyulu等，Expert?Opin?Ther?Targets.2012，16:15）。但由于正常人體細胞表面也存在有EGFR，這些EGFR是正常細胞發揮其日常生理功能所必需。因此，雖然EGFR是一個非常適宜的腫瘤專一性治療靶向物，但在利用其進行腫瘤治療靶向藥物的開發過程中，如何盡量避免其對正常細胞的影響，減少藥物不良反應的發生，穩定發揮和提高藥物的療效是廣大藥物開發研究人員必須考慮和面對的問題。