[發明專利]一種快速檢測黃牛SIRT1基因SNP的RFLP方法

有效

• 申請號: 201310169313.5
• 申請日: 2013-05-06
• 公開（公告）號: CN103290113A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 陳宏;李明勛;孫曉梅;藍賢勇
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速檢測黃牛SIRT1基因啟動子區SNP的RFLP方法，其特征在于：以黃牛血液基因組DNA為模板，以引物對P為引物，PCR擴增SIRT1基因啟動子，再用限制性內切酶SmaI進行酶切PCR擴增產物，對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，根據電泳結果鑒定黃牛SIRT1基因啟動子區的單核苷酸多態性。

2.如權利要求1所述的檢測黃牛SIRT1基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的引物對P為：

上游引物F：5′-GTATAGTCCACGGGGTTACAG-3′，

下游引物R：5′-CCAAACTTGTCTTTCAGAGTC-3′。

3.如權利要求1所述的檢測黃牛SIRT1基因SNP的RFLP方法，其中所述PCR擴增的反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，33個循環；72℃延伸10min。

4.如權利要求1所述的檢測黃牛SIRT1基因啟動子區SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的瓊脂糖凝膠的質量濃度為3.0%。

5.如權利要求1所述的檢測黃牛SIRT1基因啟動子區SNP的RFLP方法，其特征在于：所述的SNP位點為C/G單核苷酸多態性，位于SIRT1基因轉錄起始位點-274位。

6.如權利要求1所述的檢測黃牛SIRT1基因啟動子區SNP的RFLP方法，其特征在于，SmaI酶切3.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，電泳條帶表現為：CC基因型表現為273bp，CG基因型表現為273bp、235bp和38bp，GG基因型表現為235bp和38bp。

7.權利要求1-6中任意一項權利要求所述的方法在作為輔助選擇黃牛分子育種、從而加快良種選育速度中的應用。