[發明專利]一種食品中過敏原的體外檢測方法

有效

• 申請號: 201310169148.3
• 申請日: 2013-05-09
• 公開（公告）號: CN103257237A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 車會蓮;孫娜;周催;王靜;王翠燕;賀曉云;黃昆侖
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明涉及食品安全檢測技術領域，具體地說，涉及一種食品中過敏原的體外檢測方法。

背景技術

食品過敏是過敏性疾病的一種，可能成為某些嚴重過敏性疾病并發癥的誘因。據流行病學調查，近年來過敏癥發病率呈逐年上升的趨勢，發達國家每年有3%～4%的成年人發生食品過敏，兒童及嬰幼兒的發病率為5%。我國過敏性疾病發病率同樣呈快速增長的趨勢，已受到衛生部門的高度重視。食物過敏在相當程度上侵擾著過敏人群健康，保護消費者食用安全已成為食品安全管理部門和食品生產商面臨嚴峻的問題。因此，食物過敏已被視為一個嚴重的公共營養衛生問題，并引起了全球廣泛的關注。

食品過敏是免疫球蛋白E（IgE）介導的速發型過敏反應，臨床表現為惡心、嘔吐、哮喘、腹瀉、消化性潰瘍、蕁麻疹、過敏性皮炎等不同形式的癥狀，嚴重時可導致過敏性休克，甚至危及生命。迄今為止，食品過敏尚無特效治療方法，嚴格避免食用任何可能含有過敏原的食品是避免過敏發作的唯一方法。但由于食品配料的多樣化，使食品的組成變得十分復雜，食品過敏患者必須倍加小心，才能免受其害。因此建立精確、定量的過敏原檢測方法對于保護消費者的安全十分必要。

一般地，食品過敏原的檢測分為在體檢測、動物實驗和體外檢測。在體檢測方法主要是皮膚試驗，往往需皮內同時注射30～50種抗原，根據皮試的風團和紅斑反應推測肥大細胞釋放組胺的量，進而推測患者是否對某過敏原過敏，這種方法雖簡便、易操作、成本低，但存在特異性不高，局部痛感、潛在危險較大等缺點，皮膚試驗可能引起嚴重不良反應而給患者帶來額外的痛苦，而且這種方法的診斷結果有時與免疫化學分析方法不一致，常會出現假陽性或假陰性。

動物模型是近年來出現的評價食品潛在過敏性的方法，大鼠、小鼠、豚鼠、豬、狗等動物模型均被用于各種食品過敏研究。它雖可模擬過敏原在人體內產生的過敏反應，卻不能反映人體經膳食暴露后發生的免疫反應，且不同的致敏途徑產生的免疫反應也不同。

食品過敏原的體外檢測方法主要有免疫化學試驗（如IgE抑制試驗、免疫印跡試驗）、介質釋放試驗（組胺釋放率檢測、β-氨基己糖苷酶釋放率檢測等）。免疫化學試驗是目前體外檢測過敏原的重要手段，通過檢測過敏患者血清中特異性IgE含量來進行過敏診斷。該方法只需過敏患者少許血清即可同時檢測多種過敏原，不受藥物影響、對被檢測者無危險，但基于人體特異性IgE的免疫試驗的結果易受相同特異性IgG的影響，而且常與皮膚試驗獲得的數據不一致。利用免疫化學手段研究顯示，過敏患者血清中IgE水平與臨床癥狀并無直接的關系，因此特異性IgE測定不能用作分析食品過敏原的直接指標。

食品導致的過敏及其嚴重程度取決于嗜堿性粒細胞、肥大細胞表面結合的IgE與相應變應原相互作用后導致介質釋放的程度和靶器官對這些介質的反應，如血清中的組胺和β-氨基己糖苷酶水平都與過敏反應嚴重程度直接相關。因此體外介質釋放試驗比單純測定血清中的IgE水平能更全面地反應機體的過敏狀態。

無論是嗜堿性粒細胞組胺釋放試驗還是嗜堿性粒細胞體外激活試驗，其靈敏性和特異性都較高，但嗜堿性粒細胞不能在體外穩定傳代培養，都需要大量的人體血清，且獲取血清樣本后要立即進行試驗，而且這種細胞不易獲得，這些都限制了人類嗜堿性粒細胞體外介質釋放這一方法的廣泛應用。

同嗜堿性粒細胞一樣，肥大細胞也是機體參與過敏反應的主要效應細胞，但目前尚未獲得大量特性均一能用于體外研究的人肥大細胞株。來自Wistar大鼠的RBL-2H3細胞系具有與人的肥大細胞相似的細胞結構和脫顆粒反應，可在體外穩定傳代培養，可作為人肥大細胞的替代方法來研究人體肥大細胞在過敏反應發生時的反應。另外，由于鼠源和人源肥大細胞膜上與IgE結合的FcεRI受體不同，RBL-2H3細胞需采用鼠血清致敏，因此在進行細胞試驗之前通過動物實驗獲取致敏血清，由RBL-2H3細胞結合鼠的血清池建立一種體外細胞模型評價方法。

但目前尚缺乏一種普遍適用的標準的體外檢測食品中過敏原的方法，目前的檢測食品過敏原致敏性的RBL-2H3細胞評價方法沒有普遍意義，不適用所有食品過敏原，不能準確反映過敏原誘發IgE介導的過敏反應。

發明內容

本發明目的是提供一種食品中過敏原的體外檢測方法，以解決現有評價方法不能準確反映過敏原誘發IgE介導的過敏反應的問題。