[發明專利]一種電流型核酸適體傳感器及制備方法

有效

• 申請號: 201310163772.2
• 申請日: 2013-04-21
• 公開（公告）號: CN103235025A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 姜利英;閆艷霞;陳青華;崔光照;姜素霞;王芬芬;胡杰;梁茂;岳保磊
• 申請（專利權）人: 鄭州輕工業學院
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器，其特征在于，該用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器包括敏感膜片和電化學電極系統兩部分，其中敏感膜片固定有能特異性結合托普霉素的核酸適體，電化學系統為集成共面陣列薄膜電極。

2.如權利要求1所述的用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器，其特征在于，所述的集成共面陣列薄膜電極可以制備成兩電極系統，包括工作電極和對電極，也可以制備成三電極系統，包括工作電極、對電極和參比電極。

3.如權利要求1所述的用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器，其特征在于，所述的核酸適體需要與之部分互補的互補鏈進行雜交形成雙鏈，雜交前需用TCEP打開二硫鍵。

4.如權利要求1所述的用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器，其特征在于，所述的互補鏈的一端需標記巰基，另一端可以無標記，也可以標記具有可逆電化學行為的電活性介質。

5.如權利要求1所述的用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器，其特征在于，所述的標記有電活性物質的互補鏈需兩端互補，互補堿基對數為35個。

6.一種用于檢測托普霉素的電流型適體傳感器的制備方法，其特征在于，該適體傳感器的制備過程包括以下步驟：

薄膜金電極的制備；

核酸適體的稀釋；

核酸適體在薄膜金電極上的組裝。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，薄膜金電極的制備過程為：

(1)電極的形狀利用Artchut?Pro?for?cutter軟件設計，然后利用羅蘭刻字機GX-24刻制在薄膜塑料基板上；

(2)揭下電極形狀所覆蓋的塑料薄膜，然后利用磁控濺射技術濺射成厚度為150nm的金薄膜；

(3)將薄膜金電極先用大量酒精擦拭，再用大量雙蒸水沖洗，最后利用等離子清洗機清洗，密封保存。

8.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，核酸適體的稀釋方法為：

合成好的核酸適體和互補鏈探針置于-20℃溫度下密閉保存；使用時，從冰箱冷凍室取出后需置于常溫下半小時，放入離心機以3000r/s的速度離心5分鐘；然后，利用PH7.4的PBS緩沖液將核酸適體和互補鏈稀釋成相同濃度；然后，將核酸適體和互補鏈進行雜交，雜交時需要注意的是當采用標記型傳感器檢測靶分子時，選擇的核酸適體互補鏈的一端標記巰基，另一端標記具有電化學活性的基團；當采用無標記型傳感器檢測靶分子時，選擇的核酸適體互補鏈的一端標記上巰基，另一端無標記；最后，雜交后形成的雙鏈通過Pt-S自組裝到薄膜金電極表面。

9.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，核酸適體在薄膜金電極上的組裝方法為：

薄膜金電極需進行預處理，先后用0.3和0.5μm的氧化鋁研磨粉進行反復拋光，用酒精擦拭，用大量雙蒸水沖洗，最后放在室溫下自然風干或者利用電熱恒溫鼓風干燥箱進行風干；將雜交后的雙鏈滴加在薄膜金電極的表面，置于室溫環境中進行風干，然后，用大量雙蒸水沖洗電極，以便將吸附力較弱的雙鏈核酸從薄膜金電極上除掉，保證電極上的雙鏈核酸穩定；最后，用巰基乙醇等小分子將電極封閉，這種固定有核酸適體的薄膜金電極稱之為核酸適體傳感器，該傳感器密閉保存于-4℃溫度下。