[發明專利]一種腺病毒IgM、IgG抗體的膠體金法檢測試紙條、試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201310162470.3
• 申請日: 2013-05-06
• 公開（公告）號: CN103267844A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 南京凱基生物科技發展有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明屬于生物檢測領域，涉及一種利用免疫測定法檢測特異性IgM、IgG抗體的試紙條、試劑盒及其制備技術；具體地說，涉及一種借助膠體金標記顯色的免疫層析反應對腺病毒IgM、IgG抗體進行聯合檢測的試紙條、試劑盒及其制備方法。

背景技術

免疫球蛋白M（Immunoglobulin?M,IgM）和免疫球蛋白G（Immunoglobulin?G,IgG）是人或動物體內最重要的兩種抗體。一種抗原（細菌或病毒等）進入機體后，最早出現的免疫球蛋白是IgM抗體，之后出現IgG抗體。盡管在某些情況下還可能出現IgA抗體，由于其臨床意義同IgG基本相同，并且IgA含量很低，在臨床檢測中得實際意義不大，因而在臨床檢測中一般不予以區分。通過檢測體內IgM、IgG抗體的存在，可以診斷人或動物對特定抗原的免疫反應狀態。若檢測出特異性IgM抗體，表明有近期感染的發生，但IgM抗體半衰期較短，IgM的檢測陰性并不能證明機體未受到感染，還需要檢測半衰期較長，含量最高的IgG抗體，以明確診斷。

腺病毒對胃腸道、呼吸道、尿道和膀胱、眼、肝臟等均可感染，人腺病毒約1/3的已知血清型通常與人類疾病相關，但一種血清型可引起不同的臨床疾患；相反，不同血清型也可引起同一種疾患。

腸道腺病毒(enteric?adenovirus，EAdv)是20世紀80年代發現的一種新的導致嬰幼兒腹瀉的主要病原。近年來的研究表明EAdv在免疫缺陷患兒中可增加發病率和延長住院時間，國內外有暴發或流行的報道。許多國家已將EAdv的檢測列入腹瀉病的常規檢查。但我國目前對EAdv的基礎、臨床及流行病學的研究還比較缺乏。近年來，隨著臨床檢測技術的提高，對其研究不斷深入，其危害性日益受到臨床醫生的重視。

腺病毒肺炎多發于6個月～2歲小兒，多為3型和7型腺病毒感染。腺病毒肺炎感染中毒癥狀嚴重，面色蒼白發灰，發病后3～4天出現嗜睡、萎靡，隨病情加重可有煩躁不安，重者抽風、昏迷，甚至出現腦膜刺激征。X線檢查初期肺紋理增粗，第2～6天可見小片狀或大片狀陰影，第2周可有胸腔積液。治療主要為抗病毒治療及并發細菌感染的治療和免疫治療。

腺病毒的診斷方法主要依靠血清學和分子生物學試驗，包括中和試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗(HIA)、DNA分子雜交法、聚合酶鏈反應(PCR)等。細胞培養、血凝抑制試驗(HIA)、補體結合試驗由于靈敏度低且特異性差大大限制了其在臨床上的應用。PCR法雖然靈敏度高特異性強，但是由于操作復雜，對操作人員的技術要求較高，也限制其臨床的推廣使用。目前，腺病毒IgM、IgG抗體檢測是國內外公認的臨床診斷較為可靠的指標之一。總之，相比上述幾種方法，膠體金免疫層析法是最方便、最快捷的，設備要求最低，可以滿足各層次醫院對腺病毒進行初步診斷，其檢測結果與臨床符合率較高，從而可以幫助腺病毒感染疑似癥狀的患者盡早建立相應治療方案。

目前單獨檢測腺病毒IgM或IgG抗體的方法很多，比如ELISA法等，但還未有通過一次操作過程即可聯合檢測腺病毒特異性IgG、IgM抗體的方法。雖然單獨檢測IgM和IgG抗體后，再綜合分析檢測結果對疾病的診斷并無影響，但操作過程繁瑣，檢測不夠方便快捷。

發明內容

針對現有檢測技術的不足，本發明的目的在于提供一種腺病毒IgM、IgG抗體的膠體金法檢測試紙條、試劑盒及其制備方法。采用本發明的試紙條或試劑盒可實現通過一次操作過程即可快速檢測腺病毒特異性IgM、IgG抗體，從而簡化操作過程，實現快速檢測的目的。

本發明的第一個目的是這樣實現的：

一種腺病毒IgM、IgG抗體的膠體金法檢測試紙條，包括底板，在底板的一面順次相互搭接地粘附有樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊為涂覆有重組Adv抗原-膠體金復合物的玻璃纖維素膜，所述硝酸纖維素膜分別包被有鼠抗人IgM抗體的檢測線、鼠抗人IgG抗體的檢測線、兔抗Adv多克隆抗體的質控線。

優選地，所述腺病毒IgM、IgG抗體的膠體金法檢測試紙條，其中重組Adv抗原-膠體金復合物以浸泡的方式涂覆在玻璃纖維素膜上干燥而得，浸泡條件為室溫浸泡2小時，干燥條件為37℃干燥4小時。

優選地，所述腺病毒IgM、IgG抗體的膠體金法檢測試紙條，其中所述鼠抗人IgG抗體、鼠抗人IgM抗體、兔抗Adv多克隆抗體分別以1.0-1.2mg/mL的濃度劃到硝酸纖維素膜上包被并干燥而得，干燥條件為37℃干燥4小時。