[發明專利]一種農桿菌介導的水稻幼苗轉基因方法

無效

• 申請號: 201310161865.1
• 申請日: 2013-05-06
• 公開（公告）號: CN103233039A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 潘大仁;符雷;周以飛;朱秋強
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種農桿菌介導的水稻幼苗轉基因方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）試驗材料的栽培：水稻種子用多菌靈浸泡后，置于適宜的容器中，放入恒溫培養箱30℃催芽，當水稻芽生長至0.8~1cm時，開始用作試驗受體；

（2）農桿菌工程菌轉化液的配制：將含有目的基因的農桿菌接種到含有篩選壓的液體培養基進行擴大培養，當菌液OD₆₀₀值達到0.6~1.0時，離心分離菌體，用含有篩選壓的AAM液體培養基重懸浮，加入乙酰丁香酮和吐溫20，使菌液OD₆₀₀值為2.0~2.5，農桿菌轉化液配制完成，待用；

（3）試驗受體的預處理：在水稻芽生長至0.8~1cm時，用刀片在離胚約1mm處切斷幼苗，用1ml一次性注射器刺傷水稻幼苗的生長點；

（4）農桿菌浸染：把（3）預處理好的材料，馬上放入到農桿菌轉化液中，25~28℃下用農桿菌轉化液浸泡10~12小時，浸染結束后，把材料移入到泥中，30～33℃光照培養，當苗有5cm以上時，移入到到大盆中生長，在生長過程中及時除去分蘗，只留主莖；

（5）對轉基因植株進行轉基因鑒定：待水稻苗有4~6葉片時，對其進行GUS組織染色篩選；待水稻苗有6~8葉片時，對其進行Hyg抗性篩選；當水稻劍葉成長至10cm以上時，對其進行PCR檢測。

2.根據權利要求1所述一種農桿菌介導的水稻幼苗轉基因方法，其特征在于：所述步驟（2）中的農桿菌轉化液中的乙酰丁香酮的濃度為400mmol/L，吐溫20的體積百分濃度為0.01%。