[發(fā)明專利]一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310159911.4
• 申請日: 2013-04-26
• 公開（公告）號: CN103232999A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 豆俊峰;王營營;丁愛中;謝恩;杜勇超
• 申請（專利權(quán)）人: 北京師范大學(xué)
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒。?

背景技術(shù)

多環(huán)芳烴(Polycyclic?Aromatic?Hydrocarbons，PAHs)是一類含有兩個或兩個以上苯環(huán)的有毒有機(jī)污染物，具有強(qiáng)烈的致癌作用、致畸作用和致突變作用。PAHs能通過生物累積及食物鏈的傳遞作用對生態(tài)環(huán)境和人體健康造成極大危害，已引起各國環(huán)境科學(xué)家的高度重視。對環(huán)境中多環(huán)芳烴的治理技術(shù)主要有物理法、化學(xué)法和生物法，其中生物法具有操作簡單、運行費用低、無二次污染等優(yōu)點。一般來說，隨著多環(huán)芳烴苯環(huán)數(shù)量的增加，其降解速率降低。低分子量的多環(huán)芳烴在環(huán)境中能較快被降解，在環(huán)境中存在的時間較短，而高分子量的多環(huán)芳烴，例如芘、熒蒽、苯并[a]芘、苯并[a]蒽、茚并[1，2，3-cd]芘、苯并[b]熒蒽及苯并[k]熒蒽等則難于降解，較長期存在于環(huán)境中。因此，構(gòu)建多環(huán)芳烴高效降解菌來強(qiáng)化降解已成為去除多環(huán)芳烴污染的一種重要方法。?

多環(huán)芳烴降解質(zhì)粒是細(xì)胞內(nèi)能夠自我復(fù)制的雙鏈環(huán)狀的小分子DNA，能降解芳香族化合物的代謝酶通常是由降解質(zhì)粒基因編碼的。因此，多環(huán)芳烴降解質(zhì)粒上攜帶了部分的降解基因信息，可通過轉(zhuǎn)化作用連接到宿主細(xì)菌中構(gòu)成重組菌，從而使重組菌表現(xiàn)相應(yīng)的降解多環(huán)芳烴的性能。從多環(huán)芳烴降解菌株中提取與純化得到多環(huán)芳烴降解質(zhì)粒對于構(gòu)建新的多環(huán)芳烴高效降解菌以及提高多環(huán)芳烴的降解性能都具有重要的意義。但是，國內(nèi)外缺少關(guān)于多環(huán)芳烴降解質(zhì)粒方面的研究報道。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒。所述含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒由菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila的菌液經(jīng)過提取與純化得到的。提取與純化含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒所用的菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila在2010年3月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，該中心位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC?No.3683。從菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila中提取與純化含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒的具體方案為：?

(1)向體積為500mL的錐形瓶內(nèi)加入400mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基、1.0mL微量金屬液、0.1mL維生素c溶液，搖勻后作為液體培養(yǎng)基備用；其中基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成為：NH₄NO₃：1.7g·L^-1，?KH₂PO₄：1.0g·L^-1，K.₂HPO₄：1.0g·L^-1，MgCl₂：0.30g·L^-1，CaCl₂·2H₂O：0.15g·L^-1；微量金屬液的組成為：CoCl₂·6H₂O：55mg·L^-1，CuCl₂：0.35mg·L^-1，H₃BO₃：11.0mg·L^-1，MnCl₂·4H₂O：45mg·L^-1，Na₂MoO₄·2H₂O：5.5mg·L^-1，NiCl₂·2H₂O：4.5mg·L^-1，ZnCl₂：4.5mg·L^-1；?

(2)在超凈工作臺中向體積為100mL的錐形瓶中加入6.0mL濃度為1g/L的苯并[a]蒽丙酮溶液，為除去丙酮將錐形瓶開口放置2天；?

(3)向步驟(2)中的錐形瓶內(nèi)加入60mL按步驟(1)配制的液體培養(yǎng)基；?

(4)在超凈工作臺中挑取菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila，將其接種至步驟(3)中的錐形瓶中，在溫度為25～30℃、轉(zhuǎn)速為100r/min的振蕩器中培養(yǎng)20～22天；?