[發明專利]一種雙水相體系萃取葡萄籽中總黃酮的方法

無效

• 申請號: 201310157902.1
• 申請日: 2013-05-02
• 公開（公告）號: CN103211926A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 張喜峰;羅光宏
• 申請（專利權）人: 甘肅凱源生物技術開發中心
• 主分類號: A61K36/87
• 分類號: A61K36/87;A61K131/00
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松

技術領域

本發明屬于一種天然產物有效成分的分離提取方法領域，特別涉及一種雙水相體系萃取葡萄籽中總黃酮的方法。

技術背景

河西走廊地處北緯36度到40度之間，擁有生產優質釀酒葡萄的最佳光、熱、水、土等資源，是我國乃至全世界有機葡萄酒的最佳產地之一。在葡萄酒加工過程中，每年產生約占葡萄加工量20-30%的大量皮渣廢棄物，其中主要是葡萄皮、葡萄籽和果梗等。葡萄籽含有多種有效成分，主要有黃酮、蛋白質、多糖、原花青素。葡萄籽中的黃酮類成分具有擴張血管、增加外周血液循環和血流速度、降低血液中的膽固醇含量、改善膽固醇和磷脂比例等作用；能有效抑制血栓的形成，對冠心病、高血壓及心腦血管疾病，并能極大地改善癥狀；能促進大腦循環代謝，改善記憶功能，對腦損傷的恢復及老年性癡呆都有積極的治療和保健作用；具有抗菌消炎、抑制癌啟動因子的作用，可提高人體免疫功能和抗衰老功能；具有強抗氧化、抗癌作用。從葡萄籽中提取的生物類黃酮與大多數黃酮相比，結構特殊，水溶性好，有效性高，生物利用度在90%以上，極易被人體吸收。因此對葡萄籽中黃酮類成分的提取分離研究是醫藥界的一個熱門課題。

現有報道中，對植物中黃酮類化合物的提取分離方法，主要有溶劑提取法、樹脂吸附法，也有超濾法及雙水相提取法。雙水相體系（ATPE）是將兩種不同的水溶性聚合物的水溶液混合時，聚合物濃度達到一定值，體系自然地分成互不相容的兩相，主要包括高聚物/高聚物雙水相體系和高聚物/無機鹽雙水相體系。

本領域已知的是，雙水相體系并非適合所有含有總黃酮類植物的萃取，即使是適合某些植物中總黃酮的提取，所述雙水相體系中的試劑具體用量、濃度、pH等條件的變化，都對總黃酮的收率、時間等都有較大影響。因此僅有少量的如中國發明專利CN101396432A采用乙醇-硫酸銨雙水相體系對香椿葉中的黃酮類物質進行分離提取的報道。另外，現有技術中對葡萄籽中總黃酮的提取一般都是用溶劑提取法，并未有人采用雙水相體系對葡萄籽中總黃酮進行提取。盡管中國發明專利CN101125841A公開了一種葡萄籽黃酮的提取方法，采用溶劑提取法對其進行多次提取，3-5天可完成一次提取，收率為64%，但是用溶劑提取法提取葡萄籽中總黃酮，工藝周期長，提取率不理想，不利于工業化生產。

發明內容

本發明的目的是提供一種成本低、傳質速率快、小試數據可直接放大、處理量大、收率高及可連續操作的雙水相體系萃取葡萄籽中總黃酮的方法。

本發明的雙水相體系萃取葡萄籽中總黃酮的方法，包括如下步驟：先將葡萄籽用乙醇提取制備葡萄籽粗提液；再將無水乙醇、硫酸銨、無機鹽、水加入到所述葡萄籽粗提液中組成雙水相體系，混勻，室溫靜置5-30min分層，得到上相（即乙醇相）和下相，取上相經減壓濃縮并干燥，得到葡萄籽總黃酮；在雙水相體系中，葡萄籽粗提液在體系中所占的質量比為5%-30%，所述無水乙醇在體系中所占的質量比為10%-30%，所述硫酸銨在體系中所占的質量比為16%-30%，所述無機鹽在體系中所占的質量比為0-5%，余量用水補足至100%，所述雙水相體系的pH為3.0-11.0。

本發明的“質量比”是指每個組分的質量與整個組分質量之和的比值。

本發明的“傳質速率”是指單位時間傳遞物質的量kmol/s。

本發明的葡萄籽粗提液是優選按如下方法制得，但不應理解為對本發明的葡萄籽粗提液的限制，選用其他類似或本領域公知的提取方法，制得的葡萄籽粗提液均在本發明的保護范圍之內：

將所述葡萄籽經過去雜、水洗、烘干、粉碎之后得到的葡萄籽粉末，然后加入相當于葡萄籽粉末體積6-10倍量的乙醇溶液，所述乙醇溶液的體積分數為30-70%，超聲處理5-15min，超聲功率為200-400W，將超聲處理后的混合液過濾除雜。

本發明的“體積分數”是指乙醇溶液中的乙醇體積與整個溶液體積的比值。

優選的葡萄籽粗提液的制法是，是加入相當于葡萄籽粉末體積8倍量的乙醇溶液，所述乙醇溶液的體積分數為50%。

進一步優選的葡萄籽粗提液的制法是，在超聲處理中，所用超聲功率為325W、處理時間為10min。

本發明的雙水相體系，當無水乙醇在體系中所占的質量比為19%-23%、硫酸銨在體系中所占的質量比為17%-24%、無機鹽在體系中所占的質量比為0-2.5%、余量用水補足至100%時，能夠取得更加效果。