[發明專利]PON-1活性檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201310156905.3
• 申請日: 2013-04-30
• 公開（公告）號: CN103233061A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 王連升;張建華
• 申請（專利權）人: 王連升;張建華
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44;C07F9/12
• 代理公司: 上海申蒙商標專利代理有限公司 31214
• 代理人: 陳曉華

1.一種對硝基苯磷酸二乙酯的合成方法，其特征在于所述合成方法的化學反應方程式為：????????????????????????????????????????????????

所述合成方法至少包括如下步驟：取適量的對硝基酚和氯磷酸二乙酯，以及輕質氧化鎂，將三者混合均勻，在室溫下充分反應生成呈固體和油狀液體的混合物；加入適量二氯甲烷溶解所述混合物，加入PH值小于10.2的堿溶液以洗去多余的所述對硝基酚和輕質氧化鎂；此時，溶液分層，上層為水層，下層為混合溶液，濾除所述水層，并干燥處理；其后對所述混合溶液進行減壓蒸餾以除去其它雜質，得到合成產物對硝基苯磷酸二乙酯。

2.一種以權利要求1中所述對硝基苯磷酸二乙酯為底物的PON-1活性檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括緩沖液和底物液，所述底物液為0.15mol/L～0.42?mol/L的對硝基苯磷酸二乙酯，其溶劑為二甲基亞砜。

3.根據權利要求2所述的一種PON-1活性檢測試劑盒，其特征在于所述緩沖液中含有0.15mol/L的甘氨酸、2mol/L的NaOH、2.5×10^-3m?ol/L?的CaCl₂以及水溶劑。

4.根據權利要求2所述的一種PON-1活性檢測試劑盒，其特征在于所述二甲基亞砜中含有占其體積10%～15%的水。

5.根據權利要求3所述的一種PON-1活性檢測試劑盒，其特征在于所述緩沖液的PH值為10.0～11.0。

6.一種涉及權力要求2-5所述的以對硝基苯磷酸二乙酯為底物的PON-1活性檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于所述檢測方法至少包括如下步驟：取3000μL?PH值為10.2的所述緩沖液；在所述緩沖液中加入36μL所述底物液并混勻，其中所述底物液中的對硝基苯磷酸二乙酯濃度為0.35mol/L；之后再加入60μL血清樣本并混勻；在37℃條件下，血清樣本中的PON-1水解對硝基苯磷酸二乙酯的磷酸鍵，游離出色源對硝基酚，延遲60s之后測定對硝基酚在405nm處吸光度的變化，總共記錄180s，計算每分鐘內平均吸光度的變化，最后計算出PON-1的活性和濃度。