[發(fā)明專利]一種以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310154402.2
• 申請(qǐng)日: 2013-04-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103205409A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王業(yè)富;高麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢真福醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/56
• 分類號(hào): C12N9/56;C12R1/125
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

1.一種以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于包括如下步驟：用特制營(yíng)養(yǎng)液浸泡黑豆，將浸泡后的黑豆進(jìn)行蒸煮，再接種納豆菌進(jìn)行發(fā)酵；

所述的特制營(yíng)養(yǎng)液包括如下濃度成分：乳糖5-15g/L、胰蛋白胨10-30g/L、Na₂HPO₄·12H₂O?1-10g/L、NaH₂PO₄·2H₂O?0.5-1.5g/L、MgSO₄·7H₂O?0.1-1g/L、CaCl₂?0.1-0.5g/L，pH?7.0-7.5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于所述的特制營(yíng)養(yǎng)液包括如下濃度成分：乳糖10g/L、胰蛋白胨20g/L、Na₂HPO₄·12H₂O?5g/L、NaH₂PO₄·2H₂O?1g/L、MgSO₄·7H₂O?0.5g/L、CaCl₂?0.2g/L，pH?7.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的黑豆與特制營(yíng)養(yǎng)液的質(zhì)量體積比為1?:?3；所述的浸泡為15-25℃浸泡16-20h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的蒸煮為0.1MPa?、121℃蒸煮30-40min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的接種為將蒸煮后的黑豆自然冷卻至40-50℃后于無(wú)菌條件下按黑豆重量的10%接種納豆菌種子液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的納豆菌為Bacillus?subtilis?QK02，由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC?NO:?M?203078。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的發(fā)酵的條件為溫度37-42℃，濕度75%-85%，物料厚度2-3cm，發(fā)酵時(shí)間為24h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于還包括提取分離和冷凍干燥步驟。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的提取分離包括浸提、沉淀、柱層析步驟；其中，浸提為用生理鹽水于4℃浸提12-24h；沉淀為用飽和度為25%和65%的硫酸銨進(jìn)行分級(jí)沉淀；柱層析填料用CM-Sepharose?Fast?Flow。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的以黑豆為原料制備高活性納豆激酶的方法，其特征在于：所述的冷凍干燥的條件為真空度10?Pa、冷阱溫度-50℃、干燥時(shí)間24h。