[發明專利]一種具有高穩定性和高特異性的葡萄糖脫氫酶細菌表面展示系統及其制備和應用在審
| 申請號： | 201310152468.8 | 申請日： | 2013-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN104120102A | 公開（公告）日： | 2014-10-29 |
| 發明（設計）人： | 劉愛驊;梁波;唐湘江 | 申請（專利權）人： | 中國科學院青島生物能源與過程研究所 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/63 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李穎 |
| 地址： | 266101 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 具有 穩定性 特異性 葡萄糖 脫氫酶 細菌 表面 展示 系統 及其 制備 應用 | ||
1.一種具有高穩定性和高特異性的葡萄糖脫氫酶細菌表面展示系統，其特征在于：以含有來源于枯草芽孢桿菌的葡萄糖脫氫酶基因gdh和冰核蛋白基因的質粒作為基礎質粒，將編碼目標蛋白葡萄糖脫氫酶的基因序列gdh-m中引入突變的堿基，構建葡萄糖脫氫酶突變體細菌表面展示質粒；從而展示在宿主細胞表面上，得到基于冰核蛋白的葡萄糖脫氫酶突變體細菌表面展示系統。
2.按權利要求1所述的具有高穩定性和高特異性的葡萄糖脫氫酶細菌表面展示系統，其特征在于：利用Quikchange定點突變方法,以質粒pTInaPbN-Gdh為模版，帶有突變堿基的正向和反向序列為引物，通過PCR反應得到突變體。
3.一種權利要求1所述的具有高穩定性和高特異性的葡萄糖脫氫酶細菌表面展示系統制備方法，其特征在于：以含有來源于枯草芽孢桿菌的葡萄糖脫氫酶基因gdh和冰核蛋白基因的質粒作為基礎質粒，利用Quikchange定點突變方法,以質粒pTInaPbN-Gdh為模版，帶有突變堿基的正向和反向序列為引物，通過PCR反應得到突變體，也就是將編碼目標蛋白葡萄糖脫氫酶的基因序列gdh-m中引入突變的堿基，構建葡萄糖脫氫酶突變體細菌表面展示質粒；該質粒含有在葡萄糖脫氫酶宿主細胞菌中表達和表面展示的所有元件，突變體與負責跨膜定位和轉運的冰核蛋白N端結構域的基因序列inaPb-N融合，從而展示在宿主細胞表面上，得到基于冰核蛋白的葡萄糖脫氫酶突變體細菌表面展示系統。
4.一種權利要求1所述的具有高穩定性和高特異性的葡萄糖脫氫酶細菌表面展示系統的應用，其特征在于：所述展示系統得到的全細胞可應用于生物能源、食品工業、生物化工、生物傳感或分析檢測中。
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