[發(fā)明專利]含有富含亮氨酸重復(fù)序列的融合蛋白及其制法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310151609.4 | 申請日： | 2013-04-26 |
| 公開（公告）號： | CN104119448A | 公開（公告）日： | 2014-10-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李華順 | 申請（專利權(quán)）人： | 李華順 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12P21/02 |
| 代理公司： | 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266 | 代理人： | 祝蓮君;雷芳 |
| 地址： | 200123 上海市浦*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 含有 富含 亮氨酸 重復(fù) 序列 融合 蛋白 及其 制法 應(yīng)用 | ||
1.一種融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白自N端至C端具有式Ia或Ib所述的結(jié)構(gòu)：
A—X—E—Y1—Y2???式Ia；
A—Y2—Y1—E—X???式Ib；
其中，
A為任選的分泌信號肽；
X為Slit3蛋白的富含亮氨酸的重復(fù)序列2(leucine-rich?repeat2，LRR2)元件；
E為酶切位點；
Y1為第一標(biāo)簽多肽元件；
Y2為第二標(biāo)簽短肽元件，所述第二標(biāo)簽短肽元件為His標(biāo)簽元件；
“—”表示連接上述元件的肽鍵或肽接頭。
2.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Y1包括SEQ?ID?NO.:2所示的改良型親和素標(biāo)簽(Strap?II標(biāo)簽)、鏈親和素(Strepavidin)標(biāo)簽。
3.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Y1為Strap?II標(biāo)簽，而Y2為8×His標(biāo)簽元件。
4.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Slit3LRR2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.:5所示。
5.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸編碼權(quán)利要求1所述的融合蛋白。
6.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述的表達(dá)載體含有權(quán)利要求5所述的多核苷酸。
7.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述的宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求6所述的表達(dá)載體或轉(zhuǎn)染了權(quán)利要求5所述的多核苷酸。
8.如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述的宿主細(xì)胞包括哺乳動物細(xì)胞；較佳地包括CHO細(xì)胞、293細(xì)胞。
9.一種制備Slit3LRR2蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟：
(i)在合適的表達(dá)條件下，培養(yǎng)如權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞，從而表達(dá)權(quán)利要求1所述的融合蛋白；
(ii)從培養(yǎng)體系中分離純化出權(quán)利要求1所述的融合蛋白；
(iii)對所述的融合蛋白，用針對元件E的蛋白酶進(jìn)行酶解，從而制得Slit3LRR2。
10.一種制備Slit3LRR2蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟：
對權(quán)利要求1所述的融合蛋白，用針對元件E的蛋白酶進(jìn)行酶解，從而制得Slit3LRR2。
11.一種純化的Slit3LRR2蛋白，其特征在于，是通過權(quán)利要求9或10所述的方法生產(chǎn)制備的。
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