[發明專利]一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法

無效

• 申請號: 201310151351.8
• 申請日: 2013-04-26
• 公開（公告）號: CN103215254A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 趙曉祥;張灣;鄧航
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

1.一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，包括：

（1）活性污泥樣樣品在處理前首先混勻，采用TENP、PBS溶液和玻璃珠震蕩法對樣品進行預處理；將經預處理的污泥樣品采用凍融法破碎，冷藏、沸水煮，再加入質量百分比濃度2%～10%的SDS緩沖液去除蛋白質；

（2）加入0.6倍樣品體積的異丙醇，顛倒混勻，進行沉淀；離心，倒掉上清液；自然風干，用TE緩沖液懸浮樣品，溶解沉淀，即得基因組DNA粗提液；加入RNase?A，35～40℃溫浴15-20min消化RNA，然后采用DNA膠回收試劑盒，按照操作說明進行純化；

（3）用紫外分光光度計測定上述純化DNA樣品在波長230、260、280nm處的吸光光度值；將上述純化DNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色后，用紫外凝膠成像系統拍照。

2.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（1）中的TENP溶液體積和PBS溶液體積為污水樣品的3～5倍；玻璃珠直徑為1～2mm，3000～5000rpm離心10～30min。

3.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（1）中的冷藏、沸水煮具體為：置于-25～-15℃冰箱中冷藏1～2h，沸水煮10～20min，重復一次。

4.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（1）中冷藏、沸水煮后，加入2～4ml?Extraction?buffer，1～5粒玻璃珠，漩渦5～10min。

5.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（1）中的SDS緩沖液的質量百分比濃度為2%。

6.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（2）中的沉淀具體為放入冰箱內沉淀1～2h或過夜沉淀。

7.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（2）中的TE緩沖液的用量為100μL。

8.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（2）中的RNase?A的濃度為10mg/mL，用量為4μL。

9.根據權利要求1所述的一種SBR中活性污泥樣品DNA的提取方法，其特征在于：所述步驟（3）中的瓊脂糖凝膠質量百分比濃度為1%，電壓為100～110V，電泳0.5～1h。