[發(fā)明專利]抗腫瘤融合蛋白及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310150747.0
• 申請日: 2013-04-26
• 公開（公告）號: CN104119444B
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 甄永蘇;羅永章;姜文國;魯薪安;尚伯楊;付彥;張勝華;周代福;李良;李毅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所;清華大學(xué);北京普羅吉生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N1/15;C12P21/00;A61K38/16;A61P35/00;C12R1/19;C12R1/465;C12R1/38
• 代理公司: 北京永新同創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11376
• 代理人: 程大軍

本發(fā)明公開了雙功能抗腫瘤融合蛋白及其制備方法和用途。具體地，本發(fā)明公開了包含力達霉素輔基蛋白與內(nèi)皮抑素的融合蛋白，所述融合蛋白可以用力達霉素發(fā)色團進行強化。還公開了重組產(chǎn)生所述融合蛋白的方法以及所述融合蛋白在治療腫瘤中的用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及內(nèi)皮抑素與力達霉素輔基蛋白的融合蛋白及其制備方法和用途。

背景技術(shù)

1971年Folkman教授(Folkman J.N Engl J Med.1971;285:1182-1186)提出腫瘤的生長依賴于血管新生。腫瘤組織中的新生血管為腫瘤生長提供營養(yǎng)和氧氣，也是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的主要途徑。通常，良性腫瘤血管生成稀少，血管生長緩慢；而大多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速。因此，抑制血管新生能明顯阻止腫瘤生長和擴散轉(zhuǎn)移。近年來，針對腫瘤新生血管靶點的新抗癌藥物(如貝伐單抗、索拉非尼、舒尼替尼)已經(jīng)進入臨床應(yīng)用，并取得了良好的療效。除此之外，作為內(nèi)源性血管生長廣譜抑制劑，內(nèi)皮抑素(Endostatin)在小鼠體內(nèi)可達到93％～97％的腫瘤抑制率，成為最引人注目的抗血管生成藥物之一。內(nèi)皮抑素是膠原蛋白XVIII羧基末端的水解片段，分子量約為20KD，含有184個氨基酸(O’Reilly,etal.(1997);Cell88(2):277-285)。世界上首例血管內(nèi)皮抑制素抗癌新藥，新型重組人血管內(nèi)皮抑素——恩度(Recombinant human endostatin，rh-Endosmtin，Endostar)是在天然Endostatin的N-末端引入附加氨基酸序列MGGSHHHHH組成的，于2006年7月在中國上市開始臨床使用，并且對晚期肺癌顯示出較好的療效。內(nèi)皮抑素能特異性地作用于旺盛增殖的血管內(nèi)皮細胞，并在腫瘤部位選擇性地富集，這表明其具有靶向治療腫瘤的潛力。

力達霉素(Lidamycin，LDM)，又被稱作C1027，是大分子肽類抗腫瘤抗生素家族的成員之一，分離自球鏈霉菌(Streptomyces globisporus)(Hu et al.,J Antibiot1988;41:1575-1579)。力達霉素分子由烯二炔類發(fā)色團和110個氨基酸的力達霉素輔基蛋白(Lidamycin apoprotein,LDP)非共價結(jié)合形成。其中發(fā)色團和輔基蛋白可以被拆分和重建，重建的分子保留與原始分子相似的、強烈的抗腫瘤生物學(xué)活性。LDP特異性結(jié)合很多腫瘤組織，其本身也具有抗腫瘤作用。

盡管血管抑制劑類藥物如恩度和化療藥物聯(lián)合使用是本領(lǐng)域常用的治療方案，但本領(lǐng)域并沒有關(guān)于內(nèi)皮抑素和力達霉素聯(lián)合使用的報道。

發(fā)明概述

在第一方面，本發(fā)明提供了一種分離的融合蛋白，其包含力達霉素輔基蛋白和內(nèi)皮抑素。在一些實施方式中，所述力達霉素輔基蛋白包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在一些實施方式中，所述內(nèi)皮抑素包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。在一些實施方式中，所述內(nèi)皮抑素包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

本發(fā)明的融合蛋白中的所述力達霉素輔基蛋白和內(nèi)皮抑素可以通過連接肽連接。在一些實施方式中，所述連接肽包含SEQ ID NO:3所示的序列。

在一具體實施方式中，本發(fā)明的融合蛋白包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

本發(fā)明的所述融合蛋白可以用聚乙二醇修飾。在一實施方式中，所述聚乙二醇的分子量為20-40kD。在一具體實施方式中，所述聚乙二醇的分子量為20kD。本發(fā)明的所述融合蛋白可以用單甲氧基聚乙二醇進行修飾。在一具體實施方式中，所述融合蛋白用單甲氧基聚乙二醇丙醛進行修飾。

在一些實施方式中，本發(fā)明所述融合蛋白還與力達霉素發(fā)色團結(jié)合。

在第二方面，本發(fā)明還提供了多核苷酸，其包含編碼本發(fā)明的融合蛋白的核苷酸序列。在一些具體實施方式中，本發(fā)明的多核苷酸包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列。