[發明專利]一種粉狀食品中小分子有毒有害物質的通用快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310144856.1
• 申請日: 2013-04-24
• 公開（公告）號: CN103278594A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 湛嘉;王時杰;孫驥;葛曉明;楊亮;曹蘇仙
• 申請（專利權）人: 寧波檢驗檢疫科學技術研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

1.一種粉狀食品中小分子有毒有害物質的通用快速檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟：

（1）樣品提取

將5.00g奶粉或米粉加入塑料離心管中，并在試管中加入400mg固體EDTA-Na保護劑、25mL提取液乙腈，20000rmp勻漿1min，然后4500rmp離心5min，得到第一上清液；將離心所得的固體殘渣加入到12mL的60%乙醇水溶液中充分混勻后，加入15mL乙腈重復提取1次，然后4500rmp離心5min得到第二上清液，將第一上清液和第二上清液合并用乙腈定容至50mL刻度線得到樣品提取液；

（2）凈化方法

a．高濃度有機溶劑沉淀碳水化合物

將樣品提取液置于離心管中，于4500rmp離心15min，沉淀碳水化合物；

b．超低溫冷凍凈化

將離心管置于金屬試管套中放入-40℃冰箱中2h，然后4500rmp離心5min后，立即取40mL，上清液快速過濾至雞心瓶中，并在雞心瓶中加入30mL異丙醇，40℃蒸至近干；

c．固相分散萃取凈化

在雞心瓶加入5mL由乙腈、乙醇和水混合成的混合提取液和2.5mL正己烷，然后將雞心瓶中的液體轉移至離心管中，40℃氮吹蒸發除去正己烷后，加入150mg氨基填料和75mg?N-丙基乙二胺填料于離心管中，充分混勻后，于13000rmp離心5min后，取4mL上清液至另一離心管中，40℃氮吹蒸發吹至0.8-1mL，然后加入0.6mL的二甲亞砜，充分混勻后，用水定容至1.5mL，用采集方法LC?Run1模式和LC?Run2模式進行測定；

（3）混合標準溶液組成和基質標準曲線制備

A．混合標準溶液組成：混合標準工作溶液濃度見表1、表2；

B．基質標準曲線定量：在5g樣品中加入0μL、50μL、100μL、200μL、400μL、800μL上述標準溶液，按照上述（1）-（2）前處理步驟進行處理；

（4）超高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜聯用測定

A．高效液相分離

液相條件為：

a）色譜柱：Acquity?Waters?HSS-T₃，2.1mm×100mm，1.8μm；

b）如果質譜采用Run1正離子模式進行測定，那么采用流動相A₁：0.1%甲酸水溶液，流動相B₁：含0.1%甲酸的甲醇；梯度洗脫程序（以體積百分比計）為：0-7min，100%A₁；7-10.5min，0%A₁；10.5-12min，100%A₁；各洗脫時間段中均以流動相B₁補足余下的百分數；

如果質譜采用Run2在正負離子切換模式進行測定，那么采用流動相A₂：2mmol/L乙酸銨水溶液，流動相B₂：甲醇；梯度洗脫程序（以體積百分比計）為：0-7min，100%A₂；7-10.5min，0%A₂；10.5-12min，100%A₂；各洗脫時間段中均以流動相B₂補足余下的百分數；

c）流速：0.4mL/min；

d）色譜柱溫度：45℃；

e）進樣量：10μL；

f）流路切換：0～1.5min切換閥打開，色譜柱流出液進入廢液，1.5min后開始質譜采集，待目標分析物全部洗脫后，流量切換至廢液；

B.質譜檢測

質譜條件為：

a）采用電噴霧離子化電離源，毛細管電壓：正離子、負離子電壓分別為3.5kV和3.0kV；

b)去溶劑氣溫度：500℃，離子源溫度：150℃；

c)去溶劑流速：900L/h，錐孔流速：50L/h；

d)碰撞氣體：氬氣3.3×10^-3毫巴；

e)分組方案：粉狀食品中小分子有毒有害物質按表1和2所示方式進行檢測；

表1.LC?Run1模式

表2.LC?Run2模式

（4）濃度計算方法

樣品中待測物的含量根據如下計算公式（1）得到：

X=C×V×1000m×1000···(1)]]>

式中：

X－試樣中待測物含量，單位為微克每升（μg/L）；

C－試樣處理液中待測物濃度，根據基質標準曲線計算得到，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V—定容體積，單位為毫升（mL）；

m－試樣體積，單位為毫升（mL）。

2.根據權利要求1所述的一種粉狀食品中小分子有毒有害物質的通用快速檢測方法，其特征在于：步驟（2）的c步驟中所述的混合提取液中乙腈、乙醇和水的混合體積比為67：10：33。