[發明專利]一種MDCK細胞改良傳代方法

無效

• 申請號: 201310142688.2
• 申請日: 2013-04-24
• 公開（公告）號: CN103215219A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 任莉娜;張崇華;杜溪喬
• 申請（專利權）人: 哈爾濱市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 高會會

1.一種MDCK細胞改良傳代方法，其特征在于MDCK細胞改良傳代方法是按照以下步驟進行的：

一、取培養瓶中培養的單層MDCK細胞，棄去培養瓶中培養液，用Hank’s平衡鹽溶液清洗MDCK細胞，棄掉洗液；

二、向步驟一培養瓶中清洗后的MDCK細胞加入1mL預熱的胰酶，放入37℃溫箱培養1min，棄掉胰酶；

三、重復步驟二操作1次；

四、向步驟三處理的MDCK細胞中加入1mL預熱的胰酶，放入37℃溫箱培養1～4min，期間顯微鏡下觀察細胞狀態，若細胞出現明顯細胞間隙時終止消化過程，棄掉胰酶；

五、向步驟四處理后的MDCK細胞中加入0.2mL胎牛血清中和殘余胰酶的活性，再補入8mL的細胞培養液，混勻制成細胞懸液分裝至T-25細胞瓶中，在37℃溫箱培養，隔天更換細胞培養液，待MDCK細胞長成單層后停止培養，即完成MDCK細胞改良傳代；其中，步驟五中所述的細胞培養液為：每1mL細胞培養液含有0.84mL的MEM、0.11mL的胎牛血清、0.012mL的L-谷氨酰胺、0.01mL的青鏈霉素和0.015mL的羥乙基哌嗪乙硫磺酸。

2.根據權利要求1所述的一種MDCK細胞改良傳代方法，其特征在于所述的胰酶為質量百分含量為0.25%的EDTA-胰酶。

3.根據權利要求1或2所述的一種MDCK細胞改良傳代方法，其特征在于所述的預熱的胰酶是指將胰酶預熱至37℃。

4.根據權利要求1所述的一種MDCK細胞改良傳代方法，其特征在于步驟一和二中所述的培養瓶為T-75。