[發明專利]一種從芒果中富集具抗氧化活性的沒食子單寧的方法

無效

• 申請號: 201310142417.7
• 申請日: 2013-04-23
• 公開（公告）號: CN103235067A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 李鮮;羅豐雷;孫崇德;陳昆松
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬于天然化合物的提取分離技術領域，具體涉及以芒果加工副產物為原料，采用固相萃取方法從芒果中富集具有較高抗氧化活性的沒食子單寧的方法。?

背景技術

芒果為漆樹科植物芒果（Mangifera?indica）的果實，含有豐富的營養物質。近年來的研究表明，芒果中因含有類胡蘿卜素，黃酮及其衍生物以及酚酸類等活性物質而具有抗氧化，消炎，抑菌，免疫調節，抑制腫瘤以及降血糖等活性，受到人們的廣泛關注。已有研究中，對于芒果的營養功能大多關注于類胡蘿卜素及酚類等物質，對于芒果沒食子單寧的活性評價，還未見有深入的報道。近年來，從其他植物材料中制備單寧的技術有較多的報道，但由于單寧復雜的結構，還未見有富集沒食子單寧的報道。芒果作為一種美味的熱帶水果受到人們的廣泛喜愛，但占果實30-65%左右的果皮和種仁，無論在芒果深加工還是鮮食過程中都成為廢棄物，研究從芒果果皮種仁中富集沒食子單寧并評價其抗氧化活性不僅可以使芒果加工過程的副產物變廢為寶，還可以為芒果的深加工提供新思路。?

所述五倍沒食子單寧結構式：?

。

發明內容

本發明目的是提供一種從芒果中富集具抗氧化活性的沒食子單寧的方法，通過以下步驟實現：?

（1）粗提物的準備：芒果加工副產物的粉末，用80%丙酮（固液比1:20）浸泡超聲30?分鐘，離心取上清，提取兩次，過濾，合并兩次濾液，在旋轉蒸發儀上蒸干并溶于雙蒸水中，得到水粗提物；芒果加工副產物選用干燥的芒果果皮或種仁；

（2）粗提物的純化：采用C18固相萃取柱（Waters?12cc,?2?g），經甲醇活化，水平衡后，將步驟（1）得到的水粗提物加入到固相萃取柱上，充分吸附后，先用水洗，去除糖酸等水溶性雜質，然后用甲醇洗脫，甲醇洗脫液真空濃縮蒸干制得粉末；

（3）利用高效液相色譜（HPLC）和液質聯用（LC-MS）技術檢測鑒定步驟（2）的粉末主要成分并定量，確認此粉末富含沒食子單寧。此經過初步純化的粉末顯示出較高的抗氧化活性（表1，2），可直接用于其它活性研究和產業化開發應用，無需再經進一步的純化。

色譜條件：流動相包括2%乙酸（A）和0.5%乙酸/色譜乙腈（1:1，v/v）（B），梯度洗脫程序：0-2?min:?10%?B，2-8?min:?10-30%?B，8-30?min:?30-40%?B，30-45?min:?40-50%?B，45-60?min:50-65%?B，60-70?min:?65-90%?B，70-71?min:?90-10%?B，71-75?min:?10%?B，流速為0.6?ml/min，固定相為XBridge^TM,?Shield，RP18（5?μm，250*4.6?mm）色譜柱，柱溫25℃，檢測波長280?nm，進樣體積10?μl。?

質譜條件：ESI離子源，負離子模式(ESI^-)；干燥氣(N₂)溫度：325?℃；流速：5.0?l/min；霧化器壓力：45psi；毛細管電壓：3500V。?

一級質譜和二級質譜產生的特征碎片與文獻報道一致，確認峰1-5分別為五-九倍沒食子單寧，以五倍沒食子單寧作為當量，進一步對粗提物中各沒食子單寧組分進行定量。?

本發明采用固相萃取技術，以芒果加工副產物干燥粉末為原料富集具有較高抗氧化活性的沒食子單寧。本發明相對于過去的工藝有如下優點：（1）生產流程安全易操作；（2）生產周期短；（4）整個純化過程通過HPLC進行精確定量，準確度高；（5）得到的粗提物粉末和Vc一起做DPPH抗氧化分析，發現其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）的能力優于Vc，說明具有很高的抗氧化活性，可用于開發功能食品、化妝品等的添加劑。?

附圖說明

圖1為本發明的工藝流程圖。?

圖2A-F?為富含沒食子單寧芒果粗提物的HPLC色譜圖。?

具體實施方式

本發明結合附圖和實施例作進一步的說明。?

實施例1??