[發明專利]一種快速提取高純度質粒DNA的方法

無效

• 申請號: 201310142265.0
• 申請日: 2013-04-23
• 公開（公告）號: CN103205417A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 韓典霖;俞萍;李曉晨;孫克非
• 申請（專利權）人: 天根生化科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 羅文群

1.一種快速提取高純度質粒DNA的方法，其特征在于該方法包括以下各步驟：

（1）對1～3毫升培養12～16小時的大腸桿菌菌液進行離心分離，離心分離的轉速為13000轉/分鐘，離心分離的時間為1分鐘，取出離心分離的沉淀物；

（2）向步驟（1）的沉淀物中加入75微升懸浮液，懸浮液的成分為：50毫摩爾葡萄糖、25毫摩爾三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和10毫摩爾乙二胺四乙酸，渦旋振蕩至沉淀完全溶解，得到第一溶液；

（3）向上述第一溶液中加入75微升堿裂解液，堿裂解液的成分為：200毫摩爾氫氧化鈉和重量體積比為1%的十二烷基硫酸鈉，上下翻轉6～8次，使步驟（2）中所得到的菌體充分裂解，得到第二溶液；

（4）向第二溶液中加入210微升快速沉淀緩沖液，上下翻轉6～8次，充分混勻，對混合物進行離心分離，離心分離的轉速為13000轉/分鐘，離心分離時間為1分鐘，

其中的快速沉淀緩沖液中各組分的質量為：

將上述各組分稱重后混合，加去離子水，得到混合液，并使混合液體積為100毫升；

（5）將步驟（4）中離心分離得到的上清液轉入硅膜吸附柱中，進行吸附離心，吸附離心的轉速為13000轉/分鐘，吸附離心時間為30秒，倒去廢液；

（6）向步驟（5）的硅膜吸附柱中加入300微升漂洗液，漂洗液的成分為10毫摩爾三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽以及體積百分比為75%的無水乙醇，漂洗液的pH值為7.5，進行脫鹽離心，脫鹽離心的轉速為13000轉/分鐘，脫鹽離心時間為30秒，倒去廢液；

（7）在步驟（6）的硅膜吸附柱中加入50～100微升洗脫緩沖液，洗脫緩沖液為10毫摩爾三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽，洗脫緩沖液的pH值為8，進行洗脫離心，洗脫離心的轉速為13000轉/分鐘，洗脫離心時間為30秒，得到高純度質粒DNA。