[發明專利]一個與乳汁多不飽和脂肪酸水平密切相關聯的基因位點及應用

無效

• 申請號: 201310141427.9
• 申請日: 2013-04-23
• 公開（公告）號: CN103233002A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 謝林;劉國良;甘振威;楊鏡玉;鄧娟;何純川;姜珊
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 長春眾益專利商標事務所(普通合伙) 22211
• 代理人: 趙正

1.一個與乳汁多不飽和脂肪酸水平密切相關聯的基因位點，其特征在于：核苷酸序列為

加黑部分為引物序列，方框內是發生互換的堿基，劃線處則是MboI限制性內切酶識別的酶切位點，箭頭所示內切酶的切割部位。

2.根據權利要求1所述的一個與乳汁多不飽和脂肪酸水平密切相關聯的基因位點的檢測方法，其特征在于：

乳母均由外周靜脈抽取抗凝血5ml，用Wizard^?Genomic?DNA?Purification?Kit試劑盒提取全血基因組DNA；步驟如下：1.5ml?Eppendorf離心管中加入細胞裂解液900μl，加入融化的全血300μl吹打混勻，室溫反應20min，以13000?rpm離心3min，吸棄上清，加入300μl核裂解液，充分振蕩反復吹打至團塊溶解，37℃水浴30min，加1.5μl?RNase充分混勻，37℃水浴15min，加入100μl蛋白沉淀液，充分混勻，室溫反應20min，以13000?rpm離心3min，將上清移至加入300μl異丙醇的離心管中，反復顛倒混勻，室溫反應15min，以13000?rpm離心3min，輕輕棄上清，留白色沉淀，用吸水紙吸干，加70%乙醇200μl洗滌1次，離心輕輕棄上清，用吸水紙吸干，室溫干燥20min，加100μl?DNA溶解液，65℃水浴2h，制成DNA樣品，于-20℃冰箱保存，使用美國BECKMAN公司的Du^?640紫外分光光度儀，分別取波長260nm、280nm?兩個波段，測得其相應DNA的OD260nm及OD280nm值，然后再通過公式，計算出DNA含量，公式為：DNA含量=50mg/ml×OD260nm×稀釋倍數，另外通過公式計算出DNA純度，公式為：DNA純度=OD260nm/OD280nm，依據相應的堿基序列合成引物，正向引物為：5’?AAGCAGGGACCTCAAGAC?3’，反向引物為：5’?AGCCCACCAAGAATGTAA?3’，PCR反應體系為20μl，其中含上下游引物各0.4μM，?8μl?2×Taq?MasterMix?，DNA模板30～50ng，PCR擴增條件為：①94℃?5min?②96℃?30s，62℃?60s，72℃?35s?2個循環；③95℃?30s，60℃60s，72℃?35s?6個循環；④94℃?55s，58℃?60s，72℃?35s?28個循環；⑤72℃10min，取PCR產物5μl用1.5%瓊脂糖凝膠電泳，以DL2000為分子量標準品，所擴增的片段長度為153bp（6886371～6886683），在PCR擴增后的反應體系中，加入適量的限制性內切酶MboI及其酶切緩沖液，置37℃溫箱5小時，經2.5%瓊脂糖凝膠電泳，根據酶切圖譜判斷基因型，存在3種基因型，其中有完全切開的純合基因型，未切開的純合基因型，既有切開又有未切開的雜合基因型。

3.根據權利要求1所述的一個與乳汁多不飽和脂肪酸水平密切相關聯的基因位點在指導孕婦及乳母營養攝取量的應用。