[發明專利]一種檢測苯乙醇胺A含量的方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310140444.0
• 申請日: 2013-04-22
• 公開（公告）號: CN103265440A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 鄧安平;曹碧云;楊紅
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C07C217/70
• 分類號: C07C217/70;C07C213/08;G01N33/566;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 李濤

1.苯乙醇胺A半抗原，其具有式（I）所示的結構式：

2.苯乙醇胺A抗原，其為權利要求1所述的半抗原與載體蛋白偶聯復合物。

3.苯乙醇胺A抗體，其為權利要求2所述的抗原作為免疫原免疫動物制得。

4.苯乙醇胺A檢測試劑盒，其包含權利要求2所述的抗原和/或權利要求3所述的抗體。

5.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，其包括：包被權利要求2所述抗原的酶標板，權利要求3所述的抗體；以及選自以下試劑的一種或多種：

A）?酶標二抗；

B）?底物液；

C）?終止液；

D）?標準品溶液；

E）?封閉液；

F）?洗滌液。

6.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述抗原為權利要求1所述的半抗原與牛血清白蛋白或卵清白蛋白的偶聯復合物；所述抗體為權利要求1所述的半抗原與牛血清白蛋白或卵清白蛋白的偶聯復合物為免疫原制得的多克隆抗體；所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG；所述底物液為TMB溶液；所述終止液為H₂SO₄溶液；所述標準品溶液為苯乙醇胺A溶液；所述封閉液為酪蛋白溶液；所述洗滌液為PBST緩沖液。

7.權利要求4～6任一項所述的檢測試劑盒在檢測苯乙醇胺A中的應用。

8.一種檢測苯乙醇胺A含量的方法，該方法包括如下步驟：

(a).加入權利要求2所述的抗原于酶標板中，50-200ng/孔，，每孔200μL，冰箱4℃過夜；

(b).用PBST緩沖液，以350μL/孔，洗板三次；

(c).加入酪蛋白進行封阻，每孔300μL，室溫保溫保濕放置1小時；

(d).用PBST緩沖液洗板三次；

(e).在酶標板的每孔中依次分別加入100μL苯乙醇胺A標準品溶液和100μL1:10000至1:50000稀釋的抗體，室溫保溫保濕放置1小時；

(f).用PBST緩沖液洗板三次；

(g).加入辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG，每孔200μL，室溫保溫保濕放置1小時；

(h).用PBST緩沖液洗板三次；

(i).加入底物溶液，每孔200μL，室溫保溫保濕避光反應，在微量振蕩器上振搖約15～25分鐘；

(j).加入5%H₂SO₄溶液，每孔50～100μL，終止酶反應；

(k).用酶標儀測定吸光度；

(l).按照(a)至(k)的步驟在步驟(e)中將標準品溶液替換為樣品溶液，測定樣品溶液吸光度，根據標準品的標準曲線和樣品溶液的吸光度得到樣品溶液苯乙醇胺A含量。

9.制備權利要求1所述苯乙醇胺A半抗原的方法，該方法是將苯乙醇胺A溶于無水乙醇中，升溫至80℃后加入水合肼、鈀碳，氮氣保護條件下80℃回流反應得到。

10.制備權利要求2所述苯乙醇胺A抗原的方法，該方法是將權利要求1所述的苯乙醇胺A半抗原溶解于水中，緩慢滴加NaNO₂溶液，并用鹽酸調pH值為1.5，暗處4℃反應1～10小時，經初步測定重氮化完成之后，緩慢滴加尿素溶液終止反應，將上述重氮化溶液逐滴加入到0.01～0.02%的載體蛋白溶液中，調節pH為6～9，4℃緩慢攪拌1～10小時，透析1～5天即得。