[發明專利]一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的制備方法及應用

無效

• 申請號: 201310136866.0
• 申請日: 2013-04-19
• 公開（公告）號: CN103235144A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 魏琴;杜斌;于海琴;吳丹;張勇;毛珂霞;李賀;馬洪敏
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于納米功能材料、環境檢測、生物免疫技術和電化學分析領域，公開了一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的制備方法及應用。

背景技術

雌激素是一種重要的生理激素，雌激素生物體的生理調節與不孕癥、肥胖、絕經期的乳腺癌、前列腺癌、老年癡呆和骨質疏松癥等多種人體疾病有關。人造雌激素如己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷雌酚是醫學上常用于控制生理作用的藥物；也被廣泛用于促進牲畜生長，雌激素藥物一部分通過排泄物排出到環境水中，而其余仍保存在生物體中。

己烯雌酚是人工合成的非甾體雌激素物質，能產生與天然雌二醇相同的所有藥理與治療作用。主要用于雌激素低下癥及激素平衡失調引起的功能性出血、閉經，還可用于死胎引產前，以提高子宮肌層對催產素的敏感性。

許多證據證明這些天然的以及人工合成的藥物在低濃度(ng?mL^-1)也可能成為人體健康的潛在危機，如癌癥和其他病癥等。在許多國家雌激素已經被禁止添加到動物的飼料中。因此，雌激素的禁止使用已經成為亟待解決的問題，而建立水中雌激素的高靈敏、特異性快速檢測方法迫在眉睫。

目前對復合樣品中低濃度目標雌激素的檢測方法存在許多不足。電化學免疫傳感器具有樣品預處理簡單、成本低、靈敏度高、特異性強的優點，成為研究的重要手段。

本實驗將Pt納米粒子雜化至孔徑較大的SBA-15的孔道及介孔壁上，制備了Pt雜化的SBA-15納米復合材料（PtSBA-15）。該材料具有SBA-15和Pt納米粒子的雙重效應，是一種高催化活性的納米復合材料。采用PtSBA-15標記二抗，檢測其對底液中過氧化氫的催化性能，制備雙通道的絲網印刷電極生物傳感器，實現了環境樣品中兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇的同時檢測。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的制備方法。

本發明的目的之二是將所制備的電化學傳感器，用于同時檢測兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇。

本發明的技術方案，包括以下步驟。

1.?一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）氨基化SBA-15的合成

將1?g?三嵌段共聚物EO20PO70EO20（P123）溶解在30?mL、1.5~2?mol?L^-1的?HCl溶液中，加入2.215?g正硅酸乙酯（TEOS），混合物在34℃下攪拌4~5?h，轉移到高壓釜在100℃條件下加熱20~22?h，冷卻后過濾，將獲得的白色粉末在空氣中干燥，然后在560℃條件下煅燒3~4?h除去模板，合成制得SBA-15；將所合成的SBA-15，加10~15?mL無水乙醇，置于100?mL三口燒瓶中，油浴，加熱到70℃后，迅速加入50?μL?3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃恒溫回流3h，離心，用無水乙醇洗滌沉淀3次，室溫下真空干燥9~11?h，得到氨基功能化的SBA-15。

（2）Pt雜化的SBA-15的合成

將氨基功能化的SBA-15與HPtCl₄以質量比1?:?0.5~?1混合并用水稀釋成溶液，將混合物在室溫下攪拌18~24?h，離心后用水重新稀釋，用稀HCl調節溶液的pH?<2，攪拌20~25?min，得到混合液；將40~50?mmol?L^-1的NaBH₄溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl₄全部還原成金屬Pt，將混合液離心、真空干燥，制得Pt雜化的SBA-15（PtSBA-15）。

（3）石墨烯（GS）溶液制備

將2mg?GS溶解于1mL高純水中，超聲0.5~2?h，制成濃度為2mg?mL^-1?GS溶液。

（4）PtSBA-15/二抗溶液的制備

取1~2?mg?PtSBA-15分散在1?mL的pH?7.4的PBS緩沖溶液中，加入0.5~1.5?mL?、質量分數2.5%的戊二醛溶液，攪拌2~4?h；加入1~2?mL兩種環境雌激素二抗（Ab₂）中的一種，將上述混合物在室溫下攪拌10~12?h，離心，制得兩種PtSBA-15/Ab₂溶液，置于4℃下儲存，備用；所述兩種環境雌激素二抗的濃度為400~500μg/mL。

（5）雙通道免疫傳感器的構建