[發明專利]一種安來霉素A與B分離方法

有效

• 申請號: 201310135343.4
• 申請日: 2013-04-17
• 公開（公告）號: CN103232530A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 胡永紅;楊文革;李佼佼;管珺;開玉美;曹崢
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;袁正英

技術領域

本發明屬于分離工程技術領域，具體涉及的是一種安來霉素A與B分離方法。

背景技術

安來霉素(Enramycin)是一種多膚類抗生素,首次由日本武田藥品工業株式會社從土壤中分離的放線菌Streptomyces?fungicidious?NO.B5477的發酵液中提取得到。初步發現該物質在需氧和厭氧條件下對主要的革蘭氏陽性菌產生強大的殺菌作用，因此被命名為Enramy-cin。飼料中添加微量就可以起到顯著的促進生長和改善飼料利用率的作用。同時,恩拉霉素具有穩定性高,低毒低藥物殘留,廣譜抗革蘭氏陽性菌活性以及不產生耐藥性等優點,是一種全新的飼料添加劑。

安來霉素的鹽酸鹽為白色或微黃色結晶性粉末，分子量約為2500，融點為225～240℃，在234～238℃分解，易溶于稀鹽酸、二甲基甲酰胺，可溶于甲醇、含水乙醇，難溶于丙酮，不溶于醋酸、苯、氯仿。安來霉素分子是由13種氨基酸的17個單體組成的巨大內酯環，脂肪酸側鏈通過酰胺鍵與內酯環連接。根據其末端脂肪酸種類不同，分為安來霉素A(C₁₀₇H₁₃₈C_l2N₂₆O₃₁)和安來霉素B(C₁₀₈H₁₄₀C_l2N₂₆O₃₁)。安來霉素的抗菌機理是抑制細菌細胞壁的合成，主要是通過阻止粘肽的合成，使細胞壁缺損，導致細胞內滲透壓升高，細胞外液滲入菌體，使細菌變形腫大，破裂而死亡，主要作用于細菌的裂殖階段。粘肽是原核生物所特有的組織，所以恩來霉素對真核細胞幾乎沒有作用，不會在動物人體內殘留，已成為抗菌促生長飼料添加劑的一線產品。目前安來霉素A與B的分離技術鮮有報道，中國專利CN102675427A公開了恩拉霉素標準品的高壓液相制備方法，該方法將發酵菌絲體萃取后收集上清液，控制上清濃度有2000ug/ml范圍內后過反相高壓液相色譜柱制得純度90%以上的恩拉霉素標準品。該方法使用反相高效液相色譜儀制備恩拉霉素，設備要求高，處理量小，純度相對不高。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，而公開了一種簡單易行的安來霉素A與B的分離純化方法，降低了生產成本、儀器設備的要求低，分離純度高，有利于工業化生產。

本發明的技術方案為：一種安來霉素A與B的分離方法，其具體步驟如下：

（1）將安來霉素發酵液抽濾，用蒸餾水沖洗濾餅，收集濾餅;

（2）將濾餅加入到有機溶劑中攪拌均勻后全部轉移到珠磨機中珠磨，收集流出漿液;

（3）將流出漿液通過超濾膜濃縮6～10倍體積后過濾，收集得濾液;

（4）將濾液通過平衡好的大孔吸附樹脂柱進行洗脫：先用鹽溶液洗脫，再用有機溶劑A洗脫，收集得A液，當液相檢測A液在5.0～5.2min無吸收峰時換有機溶劑B洗脫，收集得B液，當液相檢測B液在7.3～7.5min無吸收峰后停止洗脫;

（5）將收集的A液和B液分別濃縮干燥，分別得到安來霉素A和B。

優選步驟（1）中加入的蒸餾水與發酵液的體積比為1～2：1。

優選步驟（2）中有機溶劑為鹽酸的丙酮水溶液或者是鹽酸的乙醇水溶液，其中有機溶劑中鹽酸的摩爾濃度均為0.04～0.08mol/L，丙酮和乙醇的體積分數均為70%～95%；有機溶劑的加入量為有機溶劑與發酵液的體積比為1～3：1；珠磨條件為：珠磨溫度30～50℃,轉速5000～7000rpm，珠磨時間10～30min。

優選步驟（3）中超濾膜的截留分子量為2000～2400Da；超濾過程的壓力為0.04～0.06Mpa；溫度為30～50℃；流速為1.0～2.0mL/s。

優選步驟（4）中的大孔吸附樹脂為AB-8、HPD400或HPD500;鹽溶液為NaCl或KCl水溶液，鹽溶液為質量分數0.5%-1.0%;有機溶劑A為甲醇的NaCl水溶液，其中NaCl水溶液的質量分數為0.5%-1.0%，甲醇與NaCl溶液的體積比為5～7:3;有機溶液B為體積分數90%-98%的乙醇或者是鹽酸的甲醇水溶液，其中鹽酸水溶液的摩爾濃度為0.004～0.006mol/L,甲醇與HCl水溶液的體積比為1～3:1。

優選步驟（4）中鹽溶液的用量為2～4柱體積。

有益效果：

（1）所用的設備均為實驗常規設備，沒有太高要求，成本低，適合放大生產。