[發明專利]一種蘇云金芽孢桿菌晶體融合蛋白Bt Cry35Ba2的制備方法

無效

• 申請號: 201310133824.1
• 申請日: 2013-04-17
• 公開（公告）號: CN103233021A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 王保民;曹振;譚桂玉;張亮;張威;郭素琴;張瑞;何麗珊
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/32
• 分類號: C12N15/32;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/21;C12N1/19;C12N15/70;C07K14/325;C07K19/00;A01N57/16;A01N63/02;A61P7/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.DNA分子，為如下a）-c）中任一：

a）序列表中序列1的第109-1269位核苷酸所示的DNA分子；

b）序列表中序列1所示的DNA分子；

c）與a）或b）所限定的DNA分子至少具有98%的同一性，且編碼序列2或序列2的第37-423位氨基酸所示蛋白質的DNA分子。

2.含有權利要求1所述DNA分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。

3.根據權利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述重組載體為重組表達載體或重組克隆載體。

4.根據權利要求3所述的重組載體，其特征在于：所述重組表達載體中啟動所述DNA分子轉錄的啟動子為T7啟動子；

所述重組表達載體具體為將所述DNA分子插入到質粒pET28a的多克隆位點處得到的重組質粒。

5.由權利要求1所述DNA分子轉錄所得的RNA分子。

6.蛋白質，為序列表中序列2所示的蛋白質。

7.權利要求1所述的DNA分子，或權利要求2-4中任一所述的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌，或權利要求5所述的RNA分子，或權利要求6所述的蛋白質在制備具有殺蟲活性的產品中的應用。

8.權利要求1所述DNA分子在提高大腸桿菌中蘇云金芽孢桿菌晶體融合蛋白Bt?Cry35Ba2表達量中的應用；所述蘇云金芽孢桿菌晶體融合蛋白Bt?Cry35Ba2為序列表中序列2所示蛋白質。

9.一種蘇云金芽孢桿菌晶體融合蛋白Bt?Cry35Ba2的制備方法，包括如下步驟：

1）將權利要求2-4中任一所述的重組載體導入大腸桿菌，得到重組大腸桿菌；

2）培養所述重組大腸桿菌，進行誘導表達，收集并裂解菌體，獲得蘇云金芽孢桿菌晶體融合蛋白Bt?Cry35Ba2；

所述蘇云金芽孢桿菌晶體融合蛋白Bt?Cry35Ba2為序列表中序列2所示蛋白質。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟2）中，所述誘導表達為：向培養有所述重組大腸桿菌的培養液中加入IPTG至終濃度為1mM，22℃震搖培養6小時。