[發(fā)明專利]多倍體積雪草品種及其培育方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310133181.0
• 申請日: 2013-04-17
• 公開（公告）號: CN103270948A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇鈺琴;蔣臻韜;黃忠藝
• 申請（專利權(quán)）人: 桂林百科農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/02
• 代理公司: 北京中海智圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11282
• 代理人: 朱永飛

1.多倍體積雪草品種培育方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）從二倍體積雪草種質(zhì)資源中篩選出優(yōu)良積雪草植株；

2）選取優(yōu)良積雪草成年植株的頂芽，經(jīng)預(yù)處理后按常規(guī)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽和愈傷組織，然后轉(zhuǎn)接到常規(guī)增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)；

3）將步驟2）中生長勢強(qiáng)的組培繼代苗或是分生能力強(qiáng)的愈傷組織暗培養(yǎng)5天后，以氨磺靈為誘變劑，采用液體或固體混培法，誘變積雪草組培繼代苗或愈傷組織產(chǎn)生染色體基因組倍數(shù)性變化，轉(zhuǎn)入常規(guī)分化培養(yǎng)基中進(jìn)行光照培養(yǎng)，獲得叢生芽，分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)成根莖葉完整的組培苗；

4）將步驟3）獲得的根莖葉完整的組培苗與二倍體組培苗對照，將葉片大小、顏色有明顯變化的植株選為基因組可能加倍的候選植株；

5）剪取步驟4）中的候選植株的分生組織，進(jìn)行染色體倍性鑒定，選取染色體數(shù)目2n=4x=36的幼苗，將其煉苗、種植成活，即獲得四倍體積雪草品種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，還包括以下步驟：

6）將四倍體積雪草和二倍體積雪草人工授粉雜交，得到雜交積雪草種子；

7）將雜交種子繁育成完整植株種植，再對其分生組織進(jìn)行染色體數(shù)目檢測，篩選獲得三倍體積雪草品種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：步驟1）中，作為原始親本的優(yōu)良積雪草植株是指：從染色體核型指數(shù)為2n=18的野生積雪草中選擇具有莖段節(jié)間長、莖粗、葉片大且厚實(shí)、有效成分含量高的成年植株。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：步驟3）所述誘變方法是：固體混培法是指在無菌條件下將生長勢強(qiáng)的組培繼代苗或是分生能力強(qiáng)的愈傷組織暗培養(yǎng)5-7天，然后轉(zhuǎn)接到添加有10-12μmol.L-1氨磺靈溶液MS固體培養(yǎng)基中在5-10℃低溫下暗培養(yǎng)2-5d，再轉(zhuǎn)入不含氨磺靈溶液常規(guī)分化培養(yǎng)基中進(jìn)行光照培養(yǎng)；液體法是指在無菌條件下先用保水性好的材料覆蓋住繼代苗頂芽或愈傷組織，然后滴入過濾滅菌的8-10μmol.L-1氨磺靈溶液將棉花完全浸濕后在5-10℃低溫下暗培養(yǎng)10-12小時，無菌水洗凈，轉(zhuǎn)入不含氨磺靈溶液的常規(guī)分化培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)。?

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：?步驟3）所述的光照培養(yǎng)是每天光照10小時，光照強(qiáng)度為1000-2000lx，培養(yǎng)溫度為25℃；

步驟3）所述的生根培養(yǎng)是：培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg/L+IAA0.3mg/L，培養(yǎng)條件為暗培養(yǎng)7d后進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1000-2000lx，培養(yǎng)時間為10h∕d，培養(yǎng)溫度是25℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：步驟5）所述的染色體倍性鑒定方法是：剪取目標(biāo)株幼嫩根尖0.5cm，清水浸泡，經(jīng)過無水乙醇：冰乙酸=3：1的卡諾固定液固定15min以上，清水沖洗15min,?濃鹽酸：甲醇=1：1的解離液解離2-30min，清水沖洗15min，切取根尖0.1mm，用卡寶品紅染色液染色，壓片觀察統(tǒng)計(jì)根尖染色體。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培育方法，其特征在于：步驟6）所述的三倍體雜交積雪草種子為：♀4N×♂2N或♂4N×♀2N→F1為3x。

8.多倍體積雪草品種，其特征在于，該多倍體積雪草品種為權(quán)利要求1所述的培育方法培育的四倍體積雪草品種，或者為權(quán)利要求2所述的培育方法培育的三倍體積雪草品種。