[發明專利]一種分步酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法

無效

• 申請號: 201310132335.4
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN103215332A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 陳合;王娟;舒國偉
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 西安智大知識產權代理事務所 61215
• 代理人: 弋才富

技術領域

本發明涉及一種分步酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法。

背景技術

高血壓是最常見的心血管疾病之一,常引起心、腦、腎并發癥,是腦卒中冠心病的主要危險因素。高血壓是指在未使用降壓藥物的情況下，收縮壓≥140mmHg和（或）舒張壓≥90mmHg的情形。據國家高血壓研究中心最新統計,我國高血壓患者已達1.2億人,發病率為10.8%,其危害程度僅次于腫瘤,已成為危害人類健康的第二號殺手。根據世界衛生組織預測，至2020年，非傳染性疾病將占我國死亡原因的79%，其中心血管病將占首位。每降低5mmHg收縮壓，患心血管疾病的風險就降低16%。

目前，常用于抗高血壓藥物治療的主要有6種降壓藥物，分別是利尿劑、α-受體拮抗劑、鈣通道阻滯劑、血管緊張素轉化酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑和α-腎上腺素受體阻滯劑。這些降血壓藥物雖然有顯著的降壓效果，但卻存在一定的毒副作用，如咳嗽、過敏性血管水腫及腎功能不全加重等。

血管緊張素轉換酶(angiotensin–eonverting?enzyme，ACE)在血壓調節中起重要作用,經碳端兩個氨基酸(His-Leu)的切除，能夠把原本無活性的血管緊張素I轉變為具有活性的血管緊張素II，引起血管收縮,使血壓上升；ACE還會使具有血管舒張功能的舒緩激膚失活，同樣又引起血壓上升的情形，ACE抑制膚能夠阻斷ACE引起的兩種生化反應過程,起降血壓作用。

ACE的制備方法主要有5種：化學降解法、酶解法、微生物發酵法、化學合成法和基因工程法，現在研究最多的是酶解法和微生物發酵法。相對于微生物發酵法，酶法反應快速，制備ACE抑制肽抑制活性高，且原料廣泛，主要有乳類蛋白、植物類蛋白及動物類蛋白，但目前乳源ACE抑制肽主要是以牛乳為原料，對羊乳尚未涉及到。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種分步酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法，酪蛋白經過超聲波處理，結構發生變化，再通過復合酶解的方法使水解反應更徹底，更迅速。

為了達到上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種分布酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法，包括以下步驟：

步驟1：將復原羊乳冷卻到4℃，使用高速離心機在6400rpm下離心15min后，除去脂肪，得到脫脂乳；

步驟2：將所得脫脂乳在35-75℃范圍內的恒溫水浴箱中進行保溫，采用磁力加熱攪拌器進行攪拌，攪拌速度為0-1600rpm，邊攪拌邊滴加HCl溶液，使脫脂乳溶液的pH值為4.2-5.0，再使用高速離心機在6400rpm下離心15min將酪蛋白進行沉淀，棄去上清液，將沉淀的酪蛋白進行冷凍干燥，在溫度為-40℃下預凍12h，再轉移到冷凍干燥機在-55℃下冷凍干燥24h，得到酪蛋白凍干粉，測定酪蛋白得率；

步驟3：將所得酪蛋白凍干粉與純凈水混合，制成質量濃度為10%的酪蛋白溶液，用180w的超聲波預處理60min；

步驟4：從所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45-65℃的恒溫水浴箱中進行保溫，滴入1mol/l的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值為6.5-8.5；按照酶與底物質量比為2-10:100的比例，加入堿性酶Alcalase，水解1-3h時；水解過程中，每間隔0.5h取5ml水解液，在90℃的恒溫水浴箱中保持10min，使堿性酶Alcalase失活，然后使用高速離心機在9000rpm的條件下離心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法測定ACE抑制活性；

步驟5：將所得上清液吸取50ml，在35-55℃的恒溫水浴箱中進行保溫，滴入1mol/l的NaOH溶液，使該溶液的pH值為7.0-9.0，再分別加入質量比為1:1、1:2、2:1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶與底物質量比為2-10：100，水解5h；水解過程中，每間隔1h取5ml水解液，在90℃的恒溫水浴箱中保持10min，使堿性酶Alcalase失活，使用高速離心機在9000rpm的條件下離心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法測定ACE抑制活性，并對上清液進行冷凍干燥，得到ACE抑制肽。

所述復原羊乳為羊奶粉與純凈水按照質量比例1:9進行混合溶解所得到的溶液。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：