[發明專利]一種分步酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法

無效

• 申請號: 201310132335.4
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN103215332A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 陳合;王娟;舒國偉
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 西安智大知識產權代理事務所 61215
• 代理人: 弋才富

1.一種分布酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：將復原羊乳冷卻到4℃，使用高速離心機在6400rpm下離心15min后，除去脂肪，得到脫脂乳；

步驟2：將所得脫脂乳在35-75℃范圍內的恒溫水浴箱中進行保溫，采用磁力加熱攪拌器進行攪拌，攪拌速度為0-1600rpm，邊攪拌邊滴加HCl溶液，使脫脂乳溶液的pH值為4.2-5.0，使用高速離心機在6400rpm下離心15min將酪蛋白進行沉淀，棄去上清液，將沉淀的酪蛋白進行冷凍干燥，在溫度為-40℃預凍12h，再轉移到冷凍干燥機在-55℃下冷凍干燥24h，得到酪蛋白凍干粉，測定酪蛋白得率；

步驟3：將所得酪蛋白凍干粉與純凈水混合，制成質量濃度為10%的酪蛋白溶液，用180w的超聲波預處理60min。

步驟4：從所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45-65℃的恒溫水浴箱中進行保溫，滴入1mol/l的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值為6.5-8.5；按照酶與底物質量比為2-10:100的比例，加入堿性酶Alcalase，水解1-3h時；水解過程中，每間隔0.5h取5ml水解液，在90℃的恒溫水浴箱中保持10min，使堿性酶Alcalase失活，然后使用高速離心機在9000rpm的條件下離心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法測定ACE抑制活性；

步驟5：將所得上清液吸取50ml，在35-55℃的恒溫水浴箱中進行保溫，滴入1mol/l的NaOH溶液，使該溶液的pH值為7.0-9.0，分別加入質量比為1:1、1:2、2:1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶與底物質量比為2-10：100，水解5h；水解過程中，每間隔1h取5ml水解液，在90℃的恒溫水浴箱中保持10min，使堿性酶Alcalase失活，使用高速離心機在9000rpm的條件下離心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法測定ACE抑制活性，并對上清液進行冷凍干燥，得到ACE抑制肽。

2.根據權利要求1所述的一種分布酶解羊乳酪蛋白制備ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述復原羊乳為羊奶粉與純凈水按照質量比例1:9進行混合溶解所得到的溶液。