[發(fā)明專利]一種斑點叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大腸桿菌中的高效表達技術(shù)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310131113.0
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN103275985A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陶妍;趙冬梅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C07K14/435
• 代理公司: 上海卓陽知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 曹翠娟

1.一種斑點叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大腸桿菌中的高效表達技術(shù)，其特征在于，包括以下步驟：

（1）通過RT-PCR獲得來自斑點叉尾鮰肝臟的編碼hepcidin成熟肽的天然cDNA片段，構(gòu)建融合表達載體pET32a-mCH，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達的重組融合蛋白TrxA-mCH經(jīng)Ni-IDA親和層析，得到純化；

（2）采用腸激酶對純化的融合蛋白TrxA-mCH進行處理，以除去融合頭，同時通過添加尿素，使目的肽得到正確的折疊；

（3）通過分子篩層析對酶切混合液進行分離，得到純化的目的肽產(chǎn)品mCH。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達技術(shù)，其特征在于，步驟（1）中所述的IPTG誘導(dǎo)表達的溫度為30℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達技術(shù)，其特征在于，步驟（2）中所述的腸激酶處理的反應(yīng)體系為：經(jīng)Ni-IDA親和層析純化的融合蛋白TrxA-mCH、腸激酶、25mmol/L?Tris-HCl、50mmol/L?NaCl、2mmol/L?CaCl₂、1mmol/L二硫蘇糖醇、終濃度為1mmol/L的尿素；反應(yīng)溫度為25℃，反應(yīng)時間為16h；腸激酶的用量為每50μg融合蛋白一個酶活單位。