[發(fā)明專利]一種原人參二醇的生物合成方法及其生產(chǎn)菌株

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310130423.0
• 申請(qǐng)日: 2013-04-15
• 公開（公告）號(hào): CN103173369A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王華明;黃濤;原靜;黃亦鈞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/19
• 分類號(hào): C12N1/19;C12N15/81;C12N15/53;C12N15/60;C12P33/00;C12R1/84
• 代理公司: 北京匯澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11228
• 代理人: 張瑾

1.一種用于生產(chǎn)原人參二醇的重組畢赤酵母工程菌，該重組畢赤酵母工程菌攜帶有含達(dá)瑪烯二醇合成酶基因的表達(dá)載體和含P450細(xì)胞色素合成酶基因的表達(dá)載體。

2.權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母工程菌，其中所述的達(dá)瑪烯二醇合成酶編碼基因具有：

（a）SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列；或者

（b）與SEQ?ID?NO:具有95%序列同一性的核苷酸序列。

3.權(quán)利要求1或2所述的重組畢赤酵母工程菌，其中所述的P450細(xì)胞色素合成酶基因具有：

（a）SEQ?ID?NO:2所示的核苷酸序列；或者

（b）與SEQ?ID?NO:具有95%序列同一性的核苷酸序列。

4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重組畢赤酵母工程菌，其中所述的畢赤酵母工程菌為畢赤酵母工程菌株GS-115。

5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的重組畢赤酵母工程菌，其中所述的含達(dá)瑪烯二醇合成酶基因的表達(dá)載體為質(zhì)粒pPicZa。

6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的重組畢赤酵母工程菌，其中所述的含P450細(xì)胞色素合成酶基因的表達(dá)載體為質(zhì)粒Ppic9k。

7.一種用于生產(chǎn)原人參二醇的重組畢赤酵母工程菌的制備方法，該方法包括下列步驟：

1）構(gòu)建攜帶有達(dá)瑪烯二醇合成酶基因的表達(dá)載體；

2）以畢赤酵母為宿主菌株，用步驟1）得到的表達(dá)載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，獲得重組表達(dá)達(dá)瑪烯二醇合成酶的畢赤酵母工程菌。

3）構(gòu)建攜帶有P450細(xì)胞色素合成酶基因的表達(dá)載體；

4）用步驟3）得到的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化步驟2）得到的畢赤酵母工程菌，獲得共表達(dá)達(dá)瑪烯二醇合成酶和P450細(xì)胞色素合成酶的畢赤酵母工程菌，即為即為本發(fā)明所述的生產(chǎn)原人參二醇的畢赤酵母工程菌。