[發明專利]新型麥芽寡糖基海藻糖水解酶、酶基因、含該基因的重組表達載體及重組工程菌及酶的制備

有效

• 申請號: 201310128714.6
• 申請日: 2013-04-15
• 公開（公告）號: CN103194434A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 陳平平;張全景;付吉明;劉敏;莊祎;王喬隆;李慧君;鄭秀寧
• 申請（專利權）人: 山東天力藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種麥芽寡糖基海藻糖水解酶，其特征是：具有如SEQ?ID?NO:3所示的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶，其特征是：具有以下特性：

（1）最適作用溫度

當pH5.3溫育60?min，最適作用溫度60℃；

（2）最適作用pH

當60℃溫育60?min，最適pH為5.3；

（3）熱穩定性

當于pH5.3溫浴60?min，在高達70℃下穩定；

（4）pH穩定性

當于60℃溫浴60?min，在pH4.5-6.5下穩定。

3.根據權利要求1或2所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶，其特征是：由下列任意一種基因表達而得：

基因1：含有SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列的基因；

基因2：含有由SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列因遺傳密碼子的兼并性而取代一個或多個堿基所形成的核苷酸序列的基因，該基因的核苷酸序列不改變由SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；

基因3：含有基因1或基因2中互補核苷酸序列的基因。

4.一種表達權利要求1或2所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶的基因。

5.根據權利要求4所述的基因，其特征是：含有下列任意一種的核苷酸序列：

核苷酸序列1：如SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列；

核苷酸序列2：由SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列因遺傳密碼子的兼并性而取代一個或多個堿基所形成的核苷酸序列，該核苷酸序列不改變由SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；

核苷酸序列3：核苷酸序列1或核苷酸序列2的互補核苷酸序列。

6.含有權利要求4或5所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶的基因的重組表達載體；所述重組表達載體優選由表達載體pET24a(+)和權利要求5或6所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶的基因構建而成。

7.含有權利要求4或5所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶的基因的重組工程菌。

8.根據權利要求7所述的重組工程菌，其特征是：將權利要求6所述的重組表達載體轉入大腸桿菌中構建而成；所述大腸桿菌優選為大腸桿菌BL21。

9.一種制備麥芽寡糖基海藻糖水解酶的方法，其特征是：通過培養權利要求7或8所述的重組工程菌制得。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征是：具體包括以下步驟：將重組工程菌在含有0.10-0.30?mMol/L卡那霉素的LB液體培養基中34-37℃培養12-15?h后，降溫至26-29℃，加入終濃度為0.1-0.3?mMol/L的IPTG或者0.3-0.5?mMol/L的乳糖作為誘導劑，在26-29℃下誘導培養12-18?h，然后離心或過濾收集菌體細胞；將菌體細胞破碎、離心收集上清液，得含麥芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液。