[發明專利]一種優秀冰雪運動員EB病毒轉化B淋巴細胞的方法

無效

• 申請號: 201310123132.9
• 申請日: 2013-04-11
• 公開（公告）號: CN103232971A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 徐金慶;朱紅;費郁紅;張文秀;王會;關偉軍
• 申請（專利權）人: 哈爾濱體育學院
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781;A01N1/02;C12R1/91
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種優秀冰雪運動員永生細胞系的培養方法，即通過EB病毒轉化優秀冰雪運動員B淋巴細胞建立永生細胞株的方法，屬于體育科學、人類資源學和人類細胞生物學交叉學科和領域。

背景技術

人類遺傳資源包括人類基因組DNA，它是重要的遺傳物質。用EB病毒(Epstein-Barr?Virus)轉化人外周血B淋巴細胞，使其成為一種能連續分裂、永久生存的類淋巴母細胞株。細胞株(Cell?strain)是指通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養物。而永生化(immorlization)目前尚無公認的明確概念，一般認為是體外培養細胞經過自發的或外界因素的影響而從增殖危機中逃逸，從而具有無限增殖能力的過程。自發性永生化的機率非常小，嚙齒類動物細胞為10^-5～10^-6，而人類細胞則更罕見，小于10^-12。因此，學者們通過基因轉染等技術將外源性永生化基因轉人目的細胞內，以增加永生化的發生率，進而建立永生化細胞株。這樣建立的永久性類淋巴母細胞株，即永生細胞株。每一永生細胞株保存了原來提供血樣的個體的完整的基因組。

作為人類遺傳資源的一部分，運動基因遺傳資源是人類寶貴的財富，但是由于運動基因遺傳資源僅存在于運動員個體的局限性，如果對優秀的運動員不采取保護性的基因保存工作，任其退役后運動能力逐漸消退直至死亡，無疑是我國體育事業的巨大損失。因此，在人類還沒有更合理科學的開發利用運動基因遺傳資源之前，有效地保存并對其進行必要的研究就顯得尤其重要。運動基因遺傳資源，與運動能力的開發有著密切的聯系，隨著人類基因組計劃的完善，越來越多的運動基因被發現，對其功能的研究也將更加深入。鑒于此，就需要一種便捷，高效，穩定的方法對運動基因遺傳資源進行保存。由于我國對外周血及細胞樣本的保存缺乏良好的方法，無法做進一步研究，造成我國重大優秀運動基因資源的浪費。近年來，應用病毒基因的體外轉導使細胞永生化(immortalization)是建立連續傳代、性狀穩定的細胞株的較好方法，可以無限提供細胞來源，有利于運動基因機制的研究。

迄今為止，最能代表世界頂尖運動員身體素質基因的極少數群體，才有可能成為世界冠軍。人類遺傳資源是人類進行自身探索與研究不可替代的重要資源，而優秀冰雪運動員永生細胞庫的建立就是為了可以永久的保存全人類中最杰出運動員與身體素質相關的基因資源。同時也為解決以往實驗研究的接力式進行與標本的暫時性采集中存在的矛盾，以便有效的對同一研究對象進行持久的連續性研究。

正常組織來源的細胞在通常的體外培養條件下可生長和分裂，但經過有限次的細胞傳代后，就會停止增殖，發生衰老和死亡。這就限制了細胞培養技術的進一步應用。而生殖細胞、(胚胎)干細胞、部分腫瘤細胞和外源性基因轉化而構建的永生化細胞則具有無限分裂和增殖的能力，即為永生化細胞。因此，學者們提出建立永生化細胞株，使體外培養的細胞具有無限增殖能力且細胞間無差異。細胞永生化技術發展到今天已有了長足的進步，EB病毒、SV40病毒都是永生化細胞常用的轉化病毒，而如乳頭瘤病毒E6、乙型肝炎病毒(HBV)雖不是使細胞永生的常用病毒，但它們可以使一些特殊細胞的增殖能力加強。

在眾多轉化體外細胞使其永生化的方法技術中，常以采集樣本方便，病毒轉化永生化細胞率高，操作周期短的EB病毒轉化外周血B淋巴細胞建立永生細胞系，為保存優秀運動員基因，研究影響運動能力基因的最合適方法。適合于體外大規模化細胞的培養。因此建立永生化細胞株以采用EB病毒轉化外周血B淋巴細胞為佳。

ER病毒轉化優秀運動員外周血B淋巴細胞建立的永生細胞株讓原本有一定壽命的人體細胞能夠不間斷地繁殖下去，使各個領域優秀運動員的基因得以永久的保存。永生細胞株的建立不但能夠永久保存相關個體的基因，而且由于可以為研究各運動項群基因結構差別、探討各運動項群的共同點及之間差別、探索重要抑制運動能力基因在各運動項群中分布特征及遺傳學意義、建立一系列與耐力、力量、速度性相關的項群體系細胞庫、以及基因探針、基因興奮劑等諸多體育科研領域提供源源不斷的細胞和DNA，所以在體育科學研究中建立優秀運動員的永生細胞庫必將得到越來越多的重視。