[發(fā)明專利]一株檸檬酸高產(chǎn)菌株及其篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310122164.7
• 申請(qǐng)日: 2013-04-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103194398A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王德培;寇光智;李昌濤;周一江;劉劍雄;高曉彤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 日照魯信金禾生化有限公司;天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12N13/00;C12Q1/04;C12R1/685
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻

1.一株檸檬酸高產(chǎn)菌株，其特征在于：該菌株命名為T(mén)N-A09，其保藏號(hào)為CGMCC?No.5751。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)菌株，其特征在于：該菌株由代號(hào)Co827的黑曲霉誘變而來(lái)。

3.權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：

（1）、將黑曲霉Co827接種于PDA斜面，在35℃條件下靜止培養(yǎng)4天，斜面長(zhǎng)滿孢子后用無(wú)菌水沖洗孢子至帶玻璃珠的無(wú)菌三角瓶中，每支斜面洗到一只三角瓶中，用紗布包扎；

（2）、將盛有孢子懸液的三角瓶放搖床上振蕩2小時(shí)，轉(zhuǎn)速270r/min，溫度25℃，充分打散孢子；

（3）、將滅過(guò)菌的真空抽濾瓶放超凈工作臺(tái)內(nèi)，打開(kāi)電源真空泵開(kāi)始工作，將孢子懸液倒入抽濾瓶上的漏斗中，抽濾過(guò)程應(yīng)在漏斗上覆蓋四層無(wú)菌紗布，抽濾過(guò)程持續(xù)3分鐘；

（4）、抽濾完畢，用無(wú)菌鑷子取下抽濾膜，放入無(wú)菌的空培養(yǎng)皿中，移入滅菌后的常溫干燥器中干燥24h；所述的干燥器事先經(jīng)70wt%乙醇擦洗兩遍達(dá)到表面消毒，并在超凈工作臺(tái)內(nèi)經(jīng)紫外燈照射30分鐘，使干燥器內(nèi)部空間完全滅菌；

（5）、在超凈工作臺(tái)中將干燥好的孢子用接種鏟刮進(jìn)無(wú)菌的樣品瓶?jī)?nèi)，將樣品瓶裝滿，蓋好蓋子，樣品準(zhǔn)備完畢；

上述步驟（5）獲得的樣品通過(guò)搭載返回式航天器進(jìn)行太空誘變，誘變獲得的干孢子經(jīng)過(guò)耐高糖高酸的定向篩選獲得的菌株即為目標(biāo)菌株，其保藏號(hào)為CGMCC?No.5751。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：

所述的耐高糖高酸的定向篩選采用高糖高酸培養(yǎng)基培養(yǎng)定向篩選，具體步驟為：

取航天誘變后干孢子100μg到100ml無(wú)菌水中搖勻成孢子懸液，然后10倍梯度稀釋到10^-4，從10^-3、10^-4稀釋度各取100μl均勻涂布于上述高糖高酸培養(yǎng)基上，35℃靜止培養(yǎng)96h，觀察培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)出白色小菌落，即為具有耐高糖高酸性能的菌株。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述的高糖高酸培養(yǎng)基制備方法如下：

A液制作：馬鈴薯去皮，200克切成塊煮沸30min，然后用紗布過(guò)濾后補(bǔ)足水至1000mL，121℃滅菌15min，備用；

B液制作：葡萄糖200-220克，無(wú)水檸檬酸170-190克，MgSO₄·7H₂O1.5克，K₂HPO₄3.6，硫酸銨2克，瓊脂粉22克，溶于500ml蒸餾水，113℃滅菌15min，備用；

將A液和B液分別加熱至50℃，使B液充分融化后，分別取A液、B液各500毫升混合均勻，倒入培養(yǎng)皿中，冷卻備用即為高糖高酸培養(yǎng)基。