[發明專利]一種輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒的試劑及其應用

無效

• 申請號: 201310122009.5
• 申請日: 2013-04-10
• 公開（公告）號: CN103173575A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 粟智平;鐘響;張靜;王穎;魯閩;楊益娥;耿金培
• 申請（專利權）人: 粟智平
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94
• 代理公司: 煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225
• 代理人: 呂靜

1.一種輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒的試劑，包括特異引物；所述特異引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成。

2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于：所述試劑由所述特異引物和特異探針組成；所述特異探針的核苷酸序列如序列表的序列4所示。

3.如權利要求2所述的試劑，其特征在于：所述特異探針為TaqMan探針。

4.權利要求1至3中任一所述的試劑在制備輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒的試劑盒中的應用。

5.一種輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒的試劑盒，包括權利要求1至3中任一所述的試劑。

6.權利要求1至3中任一所述的試劑在輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒中的應用。

7.一種輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒的方法，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對甲進行PCR，得到PCR產物甲；以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對乙進行PCR，得到PCR產物乙；如果PCR產物甲為188bp且PCR產物乙為87bp，待測病毒為候選的菜豆莢斑駁病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成的引物對。

8.一種輔助鑒定菜豆莢斑駁病毒的方法，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對甲和特異探針進行實時熒光PCR，得到擴增曲線甲；以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對乙和所述特異探針進行實時熒光PCR，得到擴增曲線乙；根據擴增曲線甲和擴增曲線乙判斷待測病毒是否為候選的菜豆莢斑駁病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成的引物對；所述特異探針為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列4所示。

9.如權利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述待測病毒為菜豆莢斑駁病毒、南方菜豆花葉病毒、花生矮化病毒、番茄環斑病毒、煙草環斑病毒或番茄斑萎病毒。

10.一種檢測待測樣本中是否含有菜豆莢斑駁病毒的方法，包括如下步驟：

（1）提取待測樣本的總RNA，反轉錄為cDNA；

（2）以所述cDNA為模板，用特異引物對甲和特異探針進行實時熒光PCR，得到擴增曲線甲；以所述cDNA為模板，用特異引物對乙和所述特異探針進行實時熒光PCR，得到擴增曲線乙；根據擴增曲線甲和擴增曲線乙判斷待測樣本中是否含有菜豆莢斑駁病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA組成的引物對；所述特異探針為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列4所示。