[發明專利]冠心病相關基因SNP檢測芯片及使用方法

有效

• 申請號: 201310116606.7
• 申請日: 2013-04-03
• 公開（公告）號: CN104099403A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 韓雅玲;張效林;閆承慧;張佳琦;康健;黃明方;鄔澤峰;席素雅
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍沈陽軍區總醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C40B40/06
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術領域

本發明涉及基因分析檢測產品，具體的說是基因檢測芯片，更具體的說是適用于與冠心病有關的基因SNP位點檢測的基因芯片及其應用。

技術背景

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary?artery?disease，CAD,簡稱冠心病)是遺傳因素和環境因素共同作用所致的一種多基因復雜性疾病，且其發病具有明顯的家族聚集性，是世界范圍內死亡和致殘的首要原因。根據世界衛生組織預測報告,2030年世界缺血性心臟病的死亡人數將占總死亡人數的13.1%。《中國心血管病報告2011》中指出,我國冠心病死亡率城市為94.96/10萬人,農村為71.27/10萬人,較2006年分別增加了66.6%和111.6%,冠心病的防治形勢刻不容緩.近年來國內外研究表明冠心病與多個基因的SNP位點有關。

Yaling?Han等人于2008年就發現MMP-1基因的-519A/G連鎖不平衡-340C/T分析AT單倍型顯著增加ACS風險，同時又發現CX37基因的C1019T?C(CC/CT)型攜帶者是北方漢族人CAD的獨立風險因子。隨后Fang?Pei等人于2009年發現IL-18基因的-607C/A位點可能為北方漢族人AMI的基因風險因子。Xiaolin?Zhang等人于2010年發現IL-17A基因中rs8193037位點與CAD風險聯系顯著，G型（GG/GA）能增加AMI病人中的IL-17A基因表達。次年Xiaolin?Zhang等人又發現IL-8基因-251A/T位點為漢族人ACS獨立風險因子對冠心病有顯著影響。而這些SNP位點的突變率在中國人群中分布均比較廣，所以對這些易感基因位點進行基因檢測對冠心病的早期預防具有很大的意義。但目前測定這些SNP位點的方法主要采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP），測序，序列特異性引物PCR，熒光定量PCR等方法，不僅操作繁瑣，檢測周期長，通量小不能同時檢測那么多SNP位點，波動大，而且影響檢測結果的因素多，不易控制，難以滿足臨床檢驗的要求，使臨床至今還無法開展有關冠心病易感基因的檢測。

基因芯片是近幾年在高科技領域內出現的最具時代特征的重大科技進展之一。它是將能反映樣本中大量基因信息的基因探針（寡核苷酸探針、cDNA克隆、PCR產物等）有序固定在固相支持物（如醛基、氨基、巰基、羧基等活性基團修飾的載玻片或硅片、尼龍膜、硝酸纖維素膜）上形成陣列，通過與實際樣本（或擴增產物）進行雜交反應，只需一次實驗。就可高通量獲得所有待檢基因的信息。這種平行檢測、高信息通量的特點使其在基因表達、基因多態性檢測等方面的應用受到廣泛重視。用基因芯片檢測IL-8,IL-17A，IL-18,MMP-1,Connexin37等基因SNP位點，發揮基因芯片檢測操作簡單，通量大，結果準確等特點，對于臨床篩選冠心病高危人群，進行早期預防具有重要的現實意義。

發明內容

本發明提供了一種用于檢測冠心病相關基因SNP位點的基因檢測芯片，還提供了一種該芯片的使用方法。

本發明的冠心病相關基因SNP位點的基因檢測芯片，包括固相支持物和固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探針；所述寡核苷酸探針包含以下序列中的IL-8-251A/T、IL-17A?rs8193037G/A、IL-18-607C/A、MMP-1-519A/G和Connexin37C1019T在內的17-32個連續核苷酸，其中SEQ1和SEQ?ID2包含IL-8-251A/T、SEQ3和SEQ4包含IL-17A?rs8193037G/A，SEQ5和SEQ6包含IL-18-607C/A,SEQ7和SEQ8包含MMP-1-519A/G,SEQ9和SEQ10包含Connexin37C1019T。

為了增強檢測信號的強度，提高檢測結果的準確率，所述IL-8-251A/T,IL-17A?rs8193037G/A，IL-18-607C/A,MMP-1-519A/G,Connexin37C1019T位于所述探針的中部。

優選的，各探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1～10，下劃線的為SNP位點基因型：

SEQ?ID?No.1:AAAGCATACATTTGATAATTCACC（IL-8-251T）

SEQ?ID?No.2:AAAGCATACAATTGATAATTCACC（IL-8-251A）