[發(fā)明專利]反硝化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒及篩選鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310115843.1
• 申請日: 2013-04-03
• 公開（公告）號: CN103194381A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李博智;武震;宋文軍;魏紀(jì)平;朱高雄
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市興源環(huán)境技術(shù)工程有限公司;天津清鑒生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于一種細(xì)菌篩選鑒定方法及試劑盒，特別涉及一種用于污水處理的反硝化細(xì)菌篩選鑒定方法及試劑盒。

背景技術(shù)：

氨氮是引起水體污染的重要物質(zhì)之一。目前城市污水中含有大量的氨氮，若直接排放到自然環(huán)境中會造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，導(dǎo)致河流、湖泊的富營養(yǎng)化，使水體自凈能力減弱。生物脫氮是目前廢水脫氮中最經(jīng)濟(jì)有效的方法之一，而污水生物脫氮包括硝化階段和反硝化階段。其中硝化階段包括兩個階段：將NH⁴⁺-N氧化為NO^2--N的氨氧化菌；將NO^2--N氧化為NO^3--N的亞硝酸鹽氧化菌。反硝化階段是在反硝化細(xì)菌的作用下，以硝酸鹽作為最終電子受體而進(jìn)行的無氧呼吸過程，結(jié)果使硝酸鹽逐漸還原為NO₃^-、NO₂^-、NO、N₂O，最終變?yōu)镹₂從而將含氮物質(zhì)從污水處理系統(tǒng)中排出。反硝化過程是整個脫氮反應(yīng)的關(guān)鍵步驟，對于控制水體富營養(yǎng)化，處理污水和凈化水域有著極大的利用價值。

目前有大量針對反硝化細(xì)菌的篩選、分離培養(yǎng)的研究。其中比較經(jīng)典的方法是采用Giltay?培養(yǎng)基結(jié)合德漢氏小管方法對反硝化細(xì)菌進(jìn)行篩選。專利CN?101402990A描述了一種厭氧反硝化細(xì)菌篩選用培養(yǎng)基及篩選厭氧反硝化細(xì)菌的方法，篩選過程包括固體培養(yǎng)基分離、液體富集和功能驗(yàn)證。專利?CN?102041291A描述了一種反硝化菌的篩選方法，該方法直接用含氨污水對污泥進(jìn)行富集、分離，并用含目標(biāo)污染物的水對分離所得細(xì)菌進(jìn)行馴化。目前各種篩選反硝化細(xì)菌的方法均取得了不錯的結(jié)果，但是對于反硝化細(xì)菌的篩選鑒定一般均采用人工培養(yǎng)基進(jìn)行間接驗(yàn)證，沒有在污水環(huán)境下進(jìn)行驗(yàn)證，或?qū)⒔Y(jié)果與污水環(huán)境進(jìn)行擬合對比。并且采用傳統(tǒng)的驗(yàn)證方法存在工作量大、效率低的問題。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于克服上述的缺陷，提供一種針對水處理的反硝化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒及利用該試劑盒進(jìn)行反銷化細(xì)菌篩選鑒定的方法；該試劑盒是通過實(shí)驗(yàn)，配制了一系列人工反硝化鑒定培養(yǎng)基對微生物進(jìn)行反硝化能力鑒定，鑒定結(jié)果與微生物在市政污水、醫(yī)療污水中的反硝化結(jié)果進(jìn)行對比擬合，最終設(shè)計出了1種人工反硝化鑒定培養(yǎng)基，可以模擬微生物在真實(shí)污水環(huán)境下的反硝化效果，其結(jié)果可以百分之百覆蓋、模擬微生物在污水中的反硝化作用，無漏檢，可以得到較高的陽性率；該試劑盒和篩選方法是將篩選出的人工鑒定培養(yǎng)基制備成無菌預(yù)制管，并結(jié)合菌株富集管、菌種保藏液的一種操作簡單、可以定量檢測的一站式反硝化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒，利用該試劑盒進(jìn)行反銷化細(xì)菌的篩選鑒定效率高，工作量小。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種反硝化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：它是由菌株富集管、反硝化鑒定預(yù)制管、菌株保藏液組成；其中:

菌株富集管：

菌株富集管為裝有富集培養(yǎng)基的螺口凍存管，其中每升富集培養(yǎng)基所含成分如下：牛肉膏1-3g，蛋白胨1-3g，葡萄糖0.8-2.1g，磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉0.7-1.5g，硫酸鎂100-200mg，氯化鈣20-50mg，碳酸氫鈉20-120mg，微量元素母液A?1ml，微量元素母液B?1ml，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和HCl調(diào)pH至7.00-7.50；富集培養(yǎng)基配制完成并調(diào)完pH后，將富集培養(yǎng)基分裝到1.8ml螺口凍存管中，每支凍存管加入富集培養(yǎng)基1ml，分裝完畢后，115℃滅菌25-30min；

反硝化鑒定預(yù)制管：

反硝化鑒定預(yù)制管中裝有反硝化鑒定培養(yǎng)基，每升反硝化鑒定培養(yǎng)基所含成分如下：牛肉膏0.1-0.5g，蛋白胨0.1-0.5g，琥珀酸鈉1-3g，醋酸鈉0.1-0.8g，磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉0.5-1.5g，硫酸鎂100-200mg，氯化鈣5-50mg，EDTA二鈉10-100mg，硝酸鉀1-2g，亞硝酸鈉0.1-1g，1%溴百里酚藍(lán)乙醇溶液1ml，微量元素母液A?1ml，微量元素母液B?1ml，以上培養(yǎng)基用濃度10%的氫氧化鈉和HCl調(diào)pH至7.00-7.50；反硝化鑒定培養(yǎng)基配制完成并調(diào)完pH后，將反硝化鑒定培養(yǎng)基分裝到反硝化鑒定預(yù)制管中，115℃滅菌25-30min；

菌株保藏液：

菌株保藏液成分如下：甘油40-60ml，去離子水40-60ml；，115℃滅菌25-30min；

其中：

每升微量元素母液A所含成分如下：硫酸亞鐵5g，EDTA二鈉5g；