[發明專利]一種灌木柳組織培養方法

有效

• 申請號: 201310113623.5
• 申請日: 2013-04-03
• 公開（公告）號: CN103168692A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 張敏;王保松;黃利斌;陳智敏;竇全琴;施士爭
• 申請（專利權）人: 江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及柳樹的繁育方法，具體地說是涉及灌木類柳樹的組織培養方法。

背景技術

柳樹是楊柳科(Salicaceae)柳屬(Salix)植物的通稱，全世界共有526種，主要分布在北半球溫帶地區。中國有257種，120個變種和33個變型，其中絕大多數為灌木柳。灌木柳分布廣、生長快、產量高、熱值高、抗逆性強、易于更新以及木材用途廣泛，是防護林、水土保持林、風景林及用材林的重要組成樹種，也是備受關注的能源樹種。特別是灌木柳種類及其雜交的家系間、無性系間都存在著非常豐富的遺傳變異，因此進行速生、高生物量、耐鹽堿、抗病蟲害良種選育具有豐富的遺傳基礎。

灌木柳的常規繁殖以扦插為主，不同種柳樹插條生根能力除了由遺傳因素決定以外，還受到插條年齡、粗度、木質化程度、有無生長葉或活動芽等指標的影響，特別是繁殖時間有嚴格的季節限制。灌木柳還可用播種育苗進行繁殖，但其種子較小，宜隨采隨播，且不能保持良種原有的優良特性。組織培養技術是目前林業生物技術的主要內容之一，其主要用途是林木的大規模繁殖和分子育種。該技術的優點在于繁殖效率高，占用空間小，不受季節及外界環境的限制，需要母體材料少，能夠在短期內提供大量優質苗木。此外，灌木柳高效組培再生體系的成功建立，對其生物學研究、遺傳改良和多目標分子育種等工作的開展均具有重要意義。

本專利所應用的3種灌木柳材料為江蘇省林業科學研究院遺傳育種研究所雜交培育的高生物量雜種無性系2345、2367、1065，其中2345具有較強的耐鹽性。其來源見下表：

表1.3種灌木柳無性系及其來源

發明內容

本發明的目的在于提供一種取材容易、增殖速度快、繁殖系數高、繼代周期短的灌木柳組織培養繁殖方法，并為灌木柳多目標分子育種提供良好的實驗體系。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種灌木柳組織培養方法，包括以下步驟：

(1)取生長健壯、無病蟲害的1～2年生灌木柳枝條，摘除老葉，置于室溫下水培7天，每天換水1次，以新長出的嫩莖作為外植體；

(2)將步驟(1)所選取的外植體剪切成2～4cm長的小段，經70％的酒精消毒40s，再用0.1％的升汞消毒5分鐘，最后用無菌水沖洗5次。

(3)將步驟(2)中經消毒處理的外植體剪去接觸消毒液的傷口部位，留1～2cm帶芽莖段接種在含有誘導培養基的培養瓶中，培養15天，長成6～8cm高的無菌試管苗；

(4)將步驟(3)中的試管苗，剪切成1.5～2.0cm帶有1～2個腋芽的節段，轉接于含有增殖培養基的培養瓶中進行增殖培養，培養20天既為一個繼代周期，增殖系數為4～6倍；在該培養基中同時可獲得健壯的生根苗，可以省去專門的壯苗培養和生根培養階段，生根率達100％，直接進入下一步驟；

(5)將步驟(4)中的生根瓶苗開瓶培養2天進行煉苗，取出試管苗，洗凈，移栽到含有泥炭和黃心土的基質中，澆透水，用塑料薄膜覆蓋容器口，保持溫度24～28℃，相對濕度75％～85％，適當遮蔭，培養15～20天至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得灌木柳苗木，成活率大于98％。

以上步驟(2)～(4)消毒接種工作均在超凈工作臺中操作，試管苗的培養均在組織培養室內進行，其培養條件為：溫度26±2℃，光照2000Lx，光照時間16h/d，相對濕度65％～75％。

所述方法的步驟(3)誘導培養基為WPM基本培養基+0.4mg/L6-BA+0.1mg/L?GA₃+500mg/L?CH+1g/L活性炭+30g/L蔗糖+6.3g/L卡拉膠，pH值為5.7～5.8。

所述方法的步驟(4)增殖培養基為WPM基本培養基+0.6mg/L6-BA+0.05mg/L?NAA+500mg/L?CH+1g/L活性炭+30g/L蔗糖+6.3g/L卡拉膠，pH值為5.7～5.8。

所述方法的步驟(5)移栽基質的配方為泥炭：黃心土，體積比為1∶1。

進一步，所述的WPM基本培養基即木本植物組織培養基的具體配方如下：

本發明的有益效果是：

本發明以灌木柳嫩莖為外植體，利用其專用培養基，成功建立了一個灌木柳組織培養高效再生體系，為灌木柳快速繁殖提供了一種可參照的技術和方法，同時為開展柳樹遺傳改良工作奠定了基礎。本發明具有以下優點：