[發明專利]一種灌木柳組織培養方法

有效

• 申請號: 201310113623.5
• 申請日: 2013-04-03
• 公開（公告）號: CN103168692A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 張敏;王保松;黃利斌;陳智敏;竇全琴;施士爭
• 申請（專利權）人: 江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種灌木柳組織培養方法，其培養步驟如下：

(1)選材及消毒處理：選取生長健壯、無病蟲害的1～2年生灌木柳枝條，摘除老葉，置于室溫下水培7天，每天換水1次，以新長出的嫩莖作為外植體，將然后所選取的外植體剪切成2～4cm長的帶芽莖段，經70％的酒精消毒40s，再用0.1％的升汞消毒5分鐘，最后用無菌水沖洗5次。

(2)試管苗培養：在超凈工作臺上和無菌條件下，將步驟(1)中消毒處理后的外植體剪去接觸消毒液的傷口部位，留1～2cm帶芽莖段接種在含有誘導培養基的培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，光照強度為1500～2000Lx，每日光照時間為16小時，溫度26±2℃，相對濕度65％～75％，培養15天，長成6～8cm的無菌試管苗；

(3)增殖、生根培養：將步驟(2)中長成的試管苗，剪切成長度為1.5～2.0cm帶有1～2個腋芽的莖段，轉接到增殖培養基中進行增殖培養，培養條件為光照強度1500～2000Lx，每日光照時間為16小時，溫度26±2℃，相對濕度65％～75％，在該培養基中同時可獲得健壯的生根苗，無需專門的壯苗培養和生根培養階段，生根率為100％，一個周期20天的繁殖倍數為4～6倍，直至達到所需要的繁殖生產規模時進入下一步驟；

(4)將步驟(3)中株高達6～8cm、根系發達且葉片展開的再生植株開瓶培養2天進行煉苗，取出試管苗，洗凈，移栽到含有泥炭和黃心土的基質中，其中泥炭與黃心土的體積比為1∶1，然后澆透水，用塑料薄膜覆蓋容器口，保持溫度24～28℃，相對濕度75％～85％，適當遮蔭，培養15～20天至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得灌木柳苗木，成活率達99.2％。

所述的誘導培養基為：每升基本培養基+0.2mg6-芐基腺嘌呤(6-BA)+0.1mg赤霉素(GA₃)+500mg酸水解酪蛋白(CH)+1000mg活性炭；

所述的增殖培養基為：每升基本培養基+0.6mg6-芐基腺嘌呤(6-BA)+0.05mg萘乙酸(NAA)+500mg酸水解酪蛋白(CH)+1000mg活性炭。

2.根據權利要求1所述的灌木柳組織培養方法，其特征在于步驟(1)中的帶芽莖段為帶有頂芽或腋芽且長度為2～4cm的莖段。

3.根據權利要求1所述的灌木柳組織培養方法，WPM基本培養基由常量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分組成。

4.根據權利要求3所述的WPM基本培養基，其特征在于：

所述的常量元素為：硝酸銨(NH₄NO₃)400mg/L、硝酸鈣(Ca(NO₃)₂·4H₂O)556mg/L、氯化鈣(CaCl₂·2H₂O)96mg/L、硫酸鎂(MgSO₄·7H₂O)370mg/L、磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)170mg/L、硫酸鉀(K₂SO₄)990mg/L；

所述的微量元素為：硫酸錳(MnSO₄·H₂O)22.3mg/L、硫酸鋅(ZnSO₄·7H₂O)8.6mg/L、硼酸(H₃BO₃)6.2mg/L、鉬酸鈉(Na₂MoO₄·2H₂O)0.25mg/L、硫酸銅(CuSO₄·5H₂O)0.025mg/L、氯化鈷(CoCl₂.6₂)0.025mg/L；

所述的鐵鹽為：乙二胺四乙酸二鈉(Na₂·EDTA)37.3mg/L、硫酸亞鐵(FeSO₄·7H₂O)27.8mg/L；

所述的有機成分為：肌醇100mg/L、甘氨酸(Gly)2mg/L、鹽酸硫胺素(VB₁)1mg/L、鹽酸吡哆醇(VB₆)0.5mg/L、煙酸(VPP)0.5mg/L。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征是步驟(4)用于移栽的基質的配方為：泥炭∶黃心土＝1∶1。