[發明專利]紫背天葵葉片一步成苗高效離體繁殖方法

無效

• 申請號: 201310110363.6
• 申請日: 2013-04-01
• 公開（公告）號: CN103202228A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 邵玲;梁廉;梁廣堅
• 申請（專利權）人: 肇慶學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

技術領域

?本發明屬于生物技術領域，涉及珍稀瀕危植物快繁育苗的組織培養方法，具體涉及對藥食同源植物秋海棠科紫背天葵的葉片組織培養的一步成苗快速繁殖方法。

背景技術

紫背天葵（Begonia?fimbristipulata?Hance）為秋海棠科秋海棠屬肉質草本植物，中國特有物種，別名丹葉、紅天葵、散血子，常見于海拔200~1?120?m的溝谷地帶、懸崖石縫或疏林下長有苔蘚的潮濕巖石上，喜溫暖濕涼氣候，一般呈簇生或叢生的居群分布，伴生植物有苔蘚、小型蕨類、灌木等。紫背天葵在廣東的深圳、東莞、肇慶和蕉嶺等地均有分布，但以肇慶鼎湖山的紫背天葵最為有名，其模式標本即采自廣東鼎湖山。紫背天葵分布雖廣，但被限制在特殊的生境中，以云海霧氣、煙云繚繞的山谷石壁處生長最佳，種群呈離散性分布，種群數量極易受到環境變化的影響。

紫背天葵葉富含花色苷，其味酸澀、性涼，既可入藥，亦可作保健飲品，具清熱解毒、止渴生津、活血消腫、潤燥止咳的功效，全株具有較高的觀賞價值和藥用保健價值。然而，由于其險峻的適生環境、較低的生物產量，加上長期的破壞性采摘，導致野生資源日益枯竭，現已被《中國的珍稀植物》一書評估為瀕危物種的低危等級?(Lower?Risk,?LR)。

紫背天葵種子繁殖萌發率極低，通過球莖進行分株繁殖系數較低、難以滿足市場的需求。利用組織培養技術是加快紫背天葵大規模繁殖的有效途徑。現有文獻通常取其無菌苗葉片為外植體，進行胚狀體的細胞誘導，或通過愈傷組織的誘導和再分化形成不定芽，或由不定芽、球莖芽或球莖等紫背天葵離體組織或器官分化出叢生芽，然后再轉接到生根培養基誘導生根，最后形成完整的植株。再生植株（通常稱為瓶苗）仍需要經過煉苗程序后才可移栽，最終形成商品種苗。可見，迄今紫背天葵的快繁技術仍然沿用傳統的組織培養方式，要經過初代培養、繼代培養、生根培養和煉苗移栽等多個階段，程序繁瑣，費工耗時，存在育苗周期長，種質易產生變異，成本較高等缺點。因此，有必要研究其簡便、高效的一步成苗技術。一步成苗法就是外植體在脫分化后，不需要轉移到分化培養基上，而是直接在原培養基上再分化，分化的順序通常是先根后芽，直至形成健壯的全苗。它具有再生周期短，再生頻率高，易操作，培養程序簡單，不影響增殖率，保持原種特性和便于大規模生產等良好特征。

發明內容

本發明目的在于提供一種瀕危植物紫背天葵一步成苗快速繁殖技術，達到一次外植體誘導即得到大量商品幼苗的效果。它能夠顯著簡化育苗程序、縮短育苗周期、提高無性繁殖系數、降低了變異頻率、而且操作簡便，是實現紫背天葵優質種苗工廠化生產的有效途徑。同時，可為同類植物的增殖與生根一體化繁殖提供技術依據。

本發明所述的一種紫背天葵葉片一步成苗高效離體繁殖方法，包括以下步驟：（1）培養基準備，包括：配制、分裝、滅菌；所述培養基的配制是：每升MS基本培養基中添加6-芐氨基嘌呤即6-BA?0.25~0.5?mg、α-萘乙酸即NAA?0.4~0.8?mg、吲哚丁酸即IBA?0.2?mg、卡拉膠7?g、蔗糖30~40?g，混合后培養基的pH調節至6.0；所述培養基的分裝是：將配制后的培養基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養瓶中；所述培養基的滅菌是：將加入培養基的培養瓶在121℃、105?Kpa下滅菌15?分鐘，滅菌后冷卻備用；（2）外植體處理和接種，包括：采用紫背天葵無菌苗葉片為外植體，直接進行無菌接種，即在無菌條件下，將組織培養無菌苗置于無菌工作臺上切取葉片，將葉片接種于準備好的培養基上，無菌密封瓶口；（3）培養，包括：將接好種的培養瓶移入培養室進行幼苗的誘導與培養，形成健壯的紫背天葵再生苗叢，用于開瓶移栽；（4）再生植株移栽：不經煉苗，將步驟（3）得到的再生植株直接開瓶移栽至適宜的條件培養。

根據本發明所述的方法的進一步特征，所述步驟（1）中，所述培養基為：每升MS基本培養基中添加6-BA?0.25~0.5?mg、NAA?0.4~0.8?mg、IBA?0.2?mg、卡拉膠7g、蔗糖30~40g。?

根據本發明所述的方法的進一步特征，所述步驟（2）中，采用葉徑為0.8~1.5?cm的紫背天葵無菌苗葉片為外植體，直接進行無菌接種。

根據本發明所述的方法的進一步特征，所述步驟（3）中，幼苗的培養條件為：溫度為25±1?℃，光照強度為8~10?μmol.m^-2.s^-1，光照時間為每天10小時，培養時間為70~80天。培養期間勤檢查，發現污染苗及時去除。