[發(fā)明專利]一種用于眼表修復(fù)的生物膜及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310109216.7
• 申請(qǐng)日: 2013-04-01
• 公開（公告）號(hào): CN104083803A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉博文;劉影;王二浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西佰傲再生醫(yī)學(xué)有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/24;A61L27/54
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于組織工程學(xué)醫(yī)用生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于眼表修復(fù)的生物膜及其制備方法。

背景技術(shù)

羊膜，從細(xì)胞滋養(yǎng)層衍化而來(lái)，是胚胎雙層膜的內(nèi)層，由上皮細(xì)胞層，基底膜和無(wú)血管基質(zhì)組成，羊膜中包含多種膠原蛋白以及層粘連蛋白、纖連蛋白、糖胺聚糖、透明質(zhì)酸等。正是這些活性物質(zhì)的存在，可以促進(jìn)上皮細(xì)胞的黏附移行，誘導(dǎo)上皮分化，防止上皮凋亡，使得羊膜充當(dāng)一種“可移植的基底膜”來(lái)促進(jìn)上皮化。此外，羊膜基質(zhì)中還包含有很多生長(zhǎng)因子，比如神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF），肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF），角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1），表皮生長(zhǎng)因子(EGF），堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF）（Koizumi,?N.J,?et?al,?Growth?factor?mRNA?and?protein?in?preserved?human?amniotic?membrane.?Curr?Eye?Res,?2000.?20(3):?p.?173-7），抑制血管生成、抗炎的蛋白(Hao,?Y.?et,?al,?Identification?of?antiangiogenic?and?antiinflammatory?proteins?in?human?amniotic?membrane.?Cornea,?2000.?19(3):?p.?348-52)以及一些天然蛋白酶抑制因子(BK,?N,?et?al,?Analysis?of?human?amniotic?membrane?components?as?proteinase?inhibitors?for?development?of?therapeutic?agent?of?recalcitrant?keratitis.?Trophoblast?Res,?1999(13):?p.?459-466.)，它們能夠促進(jìn)眼表上皮化、減輕炎性反應(yīng)、抑制纖維組織增生和新生血管形成。因此，近年來(lái)羊膜在眼表重建中的應(yīng)用備受矚目。

由于新鮮羊膜和冷藏羊膜能夠最大程度地保留各種天然膠原及活性因子成分，因此臨床使用效果較好。但因這類羊膜未經(jīng)病毒滅活處理，無(wú)法確保其無(wú)菌狀態(tài)，存在病毒傳播隱患。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外也有一些羊膜產(chǎn)品，都是經(jīng)過凍干、脫細(xì)胞處理或常溫風(fēng)干處理；雖然，經(jīng)過凍干的羊膜可以達(dá)到理想含水率（一般1～10%），但在凍結(jié)、凍融、干燥和儲(chǔ)存過程中,?存在多種誘導(dǎo)蛋白質(zhì)變性因素（如冷凍保護(hù)劑及凍干保護(hù)劑的選擇，冷凍速率的選擇等），使凍干過程不易控制、耗時(shí)長(zhǎng)、成本高，容易造成蛋白質(zhì)變性、羊膜變脆，導(dǎo)致羊膜在手術(shù)中容易撕裂，需要反復(fù)更換，延長(zhǎng)手術(shù)時(shí)間；而常溫風(fēng)干、晾干的方法使水分揮發(fā)過程較長(zhǎng)，且干燥脫水的效果不理想(一般含水率>13%)，；另外，羊膜經(jīng)脫細(xì)胞處理后損失大量天然膠原，尤其是活性因子成分，影響了臨床使用效果。

美國(guó)專利US006152142A和US006326019B1公開的羊膜產(chǎn)品是剖腹產(chǎn)胎盤經(jīng)清洗干凈后鈍性分離去除絨毛膜，上皮向上平鋪在硝酸纖維濾紙上，之后按1：1保存于DMEM：甘油中，于-80℃冰箱中凍存，所制備的羊膜未經(jīng)脫細(xì)胞、干燥和滅菌處理，因此最大程度地保留了羊膜成分與結(jié)構(gòu)的完整性；但存在的問題有：①?保存成本太高，且不方便運(yùn)輸；②?在保存時(shí)經(jīng)過了低溫冷凍，使用時(shí)又需室溫解凍，這兩個(gè)過程都會(huì)造成羊膜膠原蛋白結(jié)構(gòu)的破壞，變得易碎；③?制備中采用硝酸纖維素濾紙為襯底，在使用中需要將羊膜撕下來(lái)，使得本來(lái)就易碎的羊膜更容易發(fā)生撕裂或卷曲，給臨床操作帶來(lái)諸多不便；④?對(duì)羊膜未進(jìn)行病毒滅活處理，具有病毒傳播隱患。

中國(guó)專利CN03150838.3和中國(guó)專利CN200480023933.7及中國(guó)專利申請(qǐng)200410075361.9公開了一種可常溫保存的生物羊膜的制備方法，是將胎盤的絨毛膜鈍性分離，清洗后鋪在硝酸纖維素濾紙上，經(jīng)冷凍干燥后包裝，鈷60輻照滅菌。所制備的羊膜，與上述美國(guó)專利類似，經(jīng)過了低溫冷凍，同樣在一定程度上對(duì)羊膜造成了破壞，使其變脆，在臨床使用中容易撕裂；其也采用硝酸纖維素濾紙作為襯底，使用時(shí)羊膜不易取下，且容易發(fā)生卷曲，給手術(shù)帶來(lái)不必要的麻煩，耗費(fèi)手術(shù)時(shí)間，耽誤病情。

中國(guó)專利申請(qǐng)201010113960.0公開了一種在低溫下（-20～4℃）使用基質(zhì)膠對(duì)羊膜基質(zhì)進(jìn)行重建及修復(fù)，采用有色染料染色，鋪膜、干燥后用鈷60消毒，從而較好地保存了羊膜上皮及基底，但在低于零度條件下進(jìn)行羊膜基質(zhì)重建，仍會(huì)造成羊膜變脆；鋪膜后將羊膜從襯底上撕下會(huì)造成撕裂或卷曲，并難以辨識(shí)羊膜的上皮面和基底面，給臨床操作帶來(lái)麻煩。