[發明專利]一種密度感應淬滅菌的檢測方法

有效

• 申請號: 201310108647.1
• 申請日: 2013-03-31
• 公開（公告）號: CN103215342A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 張曉華;湯開浩;史曉翀;張蘊慧
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/02;C12R1/01
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

1.一種密度感應淬滅菌的檢測方法，其特征在于，所述的方法是將待檢測菌株加入到溶解有AHL的、pH值為6.7的?PIPES緩沖液中制成待檢液，再將待檢液上清與添加有X-gal的A.?tumefaciens?A136報告菌的菌液進行反應；反應結束后檢測反應液的OD492和OD630單位的值，并通過公式?(0.653×OD492-OD630)/(0.267×OD630-OD492)計算標準化β-半乳糖苷酶活性值，通過比較陰性對照的標準化β-半乳糖苷酶活性值進行差異顯著性分析，最終確定待檢測菌株是否為密度感應淬滅菌。

2.權利要求1所述的方法，其步驟如下：

1）待檢測菌株的擴大培養

將待測菌株接種到液體培養基中，在28℃，170?rpm培養至穩定期獲得待測菌液；

2）待檢液的反應：在步驟1）制備的待測菌液中加入?pH值為6.7，濃度為1?M的PIPES緩沖液和C6-HSL，混勻28℃靜置培養24小時；?

3）AHL分子的檢測：

將添加有終濃度為250?μg/ml的X-gal的檢測液與步驟2）的完成反應的待檢液的上清混合，28℃靜置培養12小時；檢測OD492和OD630，然后按照(0.653×OD492-OD630)/(0.267×OD630-OD492)計算標準化β-半乳糖苷酶活性值，通過差異顯著性分析，比較陰性對照的標準化β-半乳糖苷酶活性值，最終確定待檢測菌株是否為密度感應淬滅菌；當待測菌的標準化β-半乳糖苷酶活性值顯著小于陰性對照的標準化β-半乳糖苷酶活性值時，確定待測菌株為密度感應淬滅菌。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步驟2）中PIPES緩沖液在待檢液中的體積濃度為10%，C6-HSL在待檢液中的終濃度為0.01?mM。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步驟2）中的C6-HSL用C10-HSL、C12-HSL或C14-HSL替代，且C10-HSL、C12-HSL或C14-HSL在待檢液中的終濃度為20?μM。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步驟2）中的C6-HSL用3-oxo-C6-HSL、C8-HSL、3-oxo-C8-HSL、3-oxo-C10-HSL、3-oxo-C12-HSL或3-oxo-C14-HSL替代，在待檢液中的終濃度為2?μM。

6.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步驟3）中的檢測液與待檢液上清的體積比為19：1。?