[發明專利]一種檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法

有效

• 申請號: 201310107851.1
• 申請日: 2013-03-29
• 公開（公告）號: CN103205494A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 陳澤祥;李軍;彭昊;楊威;許力干;謝宇舟;禤雄標;胡帥;馬春霞;謝永平;潘艷
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚

1.一種檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：該檢測方法包括材料的準備、LAMP引物的設計與合成、細菌的前處理、LAMP反應體系建立以及采用LAMP檢測方法，所述的LAMP檢測方法是采用特異性檢測、敏感性檢測和熒光可視化檢測的方法，反應溫度為63℃、反應在20-35min間出現擴增，引物包括外引物和內引物，

所述的外引物是F3和B3；

所述的內引物是FIP和BIP；

其中引物的序列分別為：

F3??CGAAAGCAACGGATATCGT

B3??CACCACCGAATTTCTCAGAA

FIP?CTGCTTTCGCGTGTTGGATTGCTCTTGTAGTAGCAGCTGACG

BIP?GCCGATCGTGGTTGCGGTAAACTCTTGTTCTACACGCTCT。

2.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的細菌的前處理是將細菌直接加入PBS煮沸。

3.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的LAMP反應體系建立中LAMP反應體系以25μl計：

2×反應緩沖液?????????????????????????12.5μl

FIP????????????????????????????????????????40pmol

BIP????????????????????????????????????????40pmol

F3??????????????????????????????????????????5pmol

B3??????????????????????????????????????????5pmol

LF??????????????????????????????????????????20pmol

LB??????????????????????????????????????????20pmol

模板?????????????????????????????????????????2μl

超純水???????????????????????????????????????補足25μl。

4.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的LAMP檢測方法采用實時、定量的檢測方式。

5.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的LAMP檢測方法包括實時濁度儀。

6.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的LAMP檢測方法采用密閉全程監控。

7.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的LAMP檢測方法中熒光可視化檢測采用鈣黃綠素熒光染料，熒光染料在反應前加入。

8.根據權利要求1所述的檢測副豬嗜血桿菌的LAMP方法，其特征是：所述的LAMP檢測方法檢測樣品溶液采用煮沸的PBS稀釋細菌液體。