[發明專利]一種微生物發酵生產吡咯喹啉醌的方法及所用的發酵培養基

有效

• 申請號: 201310102933.7
• 申請日: 2013-03-27
• 公開（公告）號: CN103224965A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 葛欣;張惟材;熊向華;汪建華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 北京維澳專利代理有限公司 11252
• 代理人: 王立民

1.一種微生物發酵生產吡咯喹啉醌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）活化菌種：將原始菌種甲基營養菌Methylovorus?sp.MP688接種到固體培養基中，在適合原始菌種生長的條件下進行培養，得活化的菌種；

（2）種子液的培養：將步驟（1）所得活化好的菌種接種到液體培養基中，在適合菌體生長的條件下進行培養，得種子培養液；

（3）發酵罐發酵：將步驟（2）所得種子培養液按比例接種到含有發酵培養基的發酵罐中；發酵培養過程中溫度恒定，同時，發酵罐的pH、溶解氧和攪拌轉速采用兩階段控制策略；氮源補料采用pH-氮源聯控方式進行，碳源補料采用間歇補料方式進行；

（4）收獲發酵液，得吡咯喹啉醌。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述培養溫度為30～35℃，培養時間為2～3天；所述固體培養基為在基本培養基的基礎上添加瓊脂粉和碳源甲醇，所述瓊脂粉在所述固定培養基中的濃度為1～2g/L，所述甲醇在所述固定培養基中的濃度為7.5～15g/L，其中，所述基本培養基的組分及配比如下：

基本培養基（以1L計）

MgSO₄·7H₂O????????0.4-1g，

(NH₄)₂SO₄??????????3-5g，

KH₂PO₄?????????????1.4g，

Na₂HPO₄·12H₂O?????3g，

檸檬酸鐵???????????10-30mg，

CaCl₂??????????????10-30mg，

MnCl₂·4H₂O????????5-10mg，

ZnSO₄·7H₂O????????5-10mg，

CuSO₄·5H₂O????????0.5-2mg，

葉酸???????????????0.02-0.05mg，

生物素????0.02-0.05mg，

核黃素????0.02-0.05mg，

煙酸??????0.02-0.05mg，

硫辛酸????0.02-0.05mg。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）具體步驟為：步驟（1）所得活化好的菌種挑單菌落，接種到5ml液體培養基中30～35℃搖床振蕩，轉速為200-250轉/分，培養2～3天，然后取1～2ml前述菌液接種至含有100ml液體培養基的三角瓶中在相同條件下繼續擴繁培養，直至得到菌株細胞密度（OD₆₀₀）為1.2～1.5的種子液；其中，所述液體培養基為在基本培養基的基礎上添加碳源甲醇，所述甲醇在液體培養基中的濃度為7.5～15g/L。