[發明專利]一種人DCCIK免疫活性細胞的制備方法在審

申請號：	201310102720.4	申請日：	2013-03-27
公開（公告）號：	CN104073467A	公開（公告）日：	2014-10-01
發明（設計）人：	徐荻;張尚泉;吳滌梵	申請（專利權）人：	上海宇研生物技術有限公司
主分類號：	C12N5/078	分類號：	C12N5/078;A61K35/14;A61P35/00
代理公司：	上海華工專利事務所(普通合伙) 31104	代理人：	應云平
地址：	200233 上海市***	國省代碼：	上海;31
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	一種 dccik 免疫活性細胞制備方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種人DCCIK免疫活性細胞的制備方法。

背景技術

國內外大量基礎和臨床研究證明免疫治療與傳統的手術、放療、化療相結合對腫瘤患者病情的控制、生活質量的改善和生存期的延長具有重要的作用，近來研究更發現非特異性免疫細胞可以殺傷腫瘤干細胞，防止腫瘤的復發和轉移（R.Tallerico?et?al，The?Journal?of?Immunology,2013,190（5）:2381–90）。目前國內外應用最多的非特異性免疫細胞治療方法是CIK、DCCIK細胞治療。

CIK細胞，即細胞因子誘導的殺傷細胞（Cytokine?Induced?Killer），是通過多種細胞因子在體外將人外周血單個核細胞誘導的免疫效應細胞，具有增殖能力強，對腫瘤的非MHC殺傷能力強的特點，與其它免疫細胞制劑相比具有細胞擴增數量多、抗腫瘤效果強而且毒副反應更小的優點。CIK細胞的制備方法和應用已有較多的文獻和專利公開（高岱清，一種制備CIK細胞的方法，專利申請號201210365499.7）

在人體免疫系統中，DC細胞（樹突狀細胞）是最為重要的高度專職化的主要抗原遞呈細胞，在誘導針對相關抗原的高效、特異性T細胞免疫應答中起到關鍵作用。

2001年，研究發現將腫瘤患者自體的DC細胞加入體外誘導的CIK細胞中，兩種細胞可以互相促進成熟，并誘導出比同源CIK細胞增殖活性和腫瘤細胞殺傷活性更強的細胞群（Marten,A?et?al,J?Immunother,2001,24(6):502-510）。我國科學家也開展了大量DC-CIK的共培養研究，證明DCCIK比CIK具有更強的細胞增殖率，并能分泌更多的IL12、IFNγ等細胞因子，對腫瘤細胞的殺傷活性也更為強大（Li，SJ?et?al，Zhonghua?Zhong?Liu?Za?Zhi.2007?Oct;29(10):733-7）。

現有的DCCIK培養技術需要從人外周血單個核細胞（PBMC）中分離出貼壁的單核細胞和懸浮的淋巴細胞分別誘導，等單核細胞誘導出的DC細胞成熟后再與懸浮的淋巴細胞共培養，該方法技術復雜，對操作人員的技術水平和熟練度要求也高，所以不適合用于大規模的穩定的技術推廣。

發明內容

為了解決現有的DCCIK培養技術中，DC細胞需要從貼壁的單核細胞誘導成熟后再與CIK細胞混合所存在的操作繁瑣、技術復雜的問題，本發明提供了一種簡單、高效、易推廣應用的DCCIK制備技術。

因此，本發明的第一個目的在于提供一種人DCCIK免疫活性細胞的制備方法。

本發明的第二個目的在于提供所述制備方法制備得到的人DCCIK免疫活性細胞。

本發明的第三個目的在于所述人DCCIK免疫活性細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用。

為解決上述的技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種人DCCIK免疫活性細胞的制備方法，包括以下步驟：

（1）從人外周血中分離單個核細胞；

（2）將單個核細胞接種到適合淋巴細胞培養的培養基中，加入IFNγ、IL-2、抗CD3單抗、GM-CSF、IL-4，培養3-5天；

（3）加入TNFα，繼續培養1-2天；

（4）加入IL-2，繼續培養7-10天，即得DCCIK細胞。