[發(fā)明專利]一種人DCCIK免疫活性細(xì)胞的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310102720.4
• 申請(qǐng)日: 2013-03-27
• 公開（公告）號(hào): CN104073467A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐荻;張尚泉;吳滌梵
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海宇研生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078;A61K35/14;A61P35/00
• 代理公司: 上海華工專利事務(wù)所(普通合伙) 31104
• 代理人: 應(yīng)云平

1.一種人DCCIK免疫活性細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從人外周血中分離單個(gè)核細(xì)胞；

（2）將單個(gè)核細(xì)胞接種到適合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，加入IFNγ、IL-2、抗CD3單抗、GM-CSF、IL-4，培養(yǎng)3-5天；

（3）加入TNFα，繼續(xù)培養(yǎng)1-2天；

（4）加入IL-2，繼續(xù)培養(yǎng)7-10天，即得DCCIK細(xì)胞。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中所述單個(gè)核細(xì)胞是采用人淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心的方法制備。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中所述IFNγ的濃度為200-1000U/ml、所述IL-2的濃度為100-500U/ml、所述抗CD3單抗的濃度為10-50ng/ml、所述GM-CSF的濃度為500U/ml、所述IL-4的濃度為500-1000U/ml。

5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中所述單個(gè)核細(xì)胞的細(xì)胞濃度調(diào)整為1-2×10⁶/ml。

6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中所述TNFα的濃度為500-1000U/ml。

7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中所述IL-2的濃度為500-1000U/ml。

8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的DCCIK細(xì)胞。

9.如權(quán)利要求8所述的DCCIK細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。