[發明專利]布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310102404.7
• 申請日: 2013-03-27
• 公開（公告）號: CN103243094A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 董雅娟;楊莉
• 申請（專利權）人: 董雅娟
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 青島發思特專利商標代理有限公司 37212
• 代理人: 耿霞

技術領域

本發明屬于分子遺傳學領域，涉及基因單核苷酸多態性及其檢測，特別涉及一種布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性及其檢測方法。

背景技術

布萊凱特黑牛是一種優質肉牛新品種，其牛肉含有豐富的蛋白質，氨基酸組成比豬肉更接近人體需要，能提高機體抗病能力，同時CoQ₁₀含量也相對較高，具有營養心肌、增強抵抗力的功能，是我國肉牛品種中不可多得的優質肉牛新種質，因此如何利用分子生物學技術更加快速高效的培育肉質、營養更加優良的肉牛品種是當務之急。

CoQ是生物有氧呼吸電子傳遞鏈中的必要成分，它不僅對于能量產生至關重要，還有其它功能，如活性氧自由基的清除、基因表達的調控及通過調控NAD+/NADH比率來控制細胞的氧化還原態等。而CoQ₁₀除具備以上功能外，還是人體唯一可利用的CoQ類。因此人們對CoQ₁₀的研究也越來越多，且主要集中在微生物轉基因工程、發酵工程及人類臨床醫學方面。研究發現像粟酒裂殖酵母（S.pombe）的聚十異戊二烯焦磷酸合成酶（Decaprenyl?diphosphate?synthase，DPPS）一樣，小鼠mSPS1和mDLP1只有在形成異源四聚體后，才能催化CoQ₁₀側鏈的合成，這在人類hDPS1和hDLP1上也同樣被證實，且具有專一性，是重要的限速酶。還有研究表明，人體中PDSS1或PDSS2基因的突變，都會引起少見的嬰幼兒臟器疾病。對于PDSS1基因，在其催化區的一個隱性點突變，都會引起早發型腦神經病、失聰和網狀青斑；對于PDSS2基因，其一個復合雜合子突變也會引發腎病、肌病和一種稱作Leigh綜合征的激進式神經退行性疾病，除了CoQ₁₀的初級缺乏癥，食用CoQ₁₀補充劑對嚙齒類動物的神經退行性疾病如肌萎縮性側索硬化癥（ALS）、亨廷頓氏病和帕金森氏病等有顯著療效。還有研究報導，通過對人類PDSS1基因12個外顯子的直接測序，發現在第977位（外顯子10內）處純合子T→G的替換導致蛋白質中高度保守的天冬氨酸變為谷氨酸（D308E）。而人類PDSS1基因和COQ2基因的突變，都會引起氧化磷酸化不足。

目前，本實驗室正在利用分子遺傳標記輔助育種技術對布萊凱黑特黑牛進行改良。前期董懿為等已利用10個微衛星標記分析了魯西黃牛、布萊凱特肉牛、渤海黑牛和日本和牛4個肉牛群體，結果表明本試驗利用微衛星標記分析的4個肉牛群體內和群體間的遺傳多樣性和親緣關系是有效的，可為正確評估布萊凱特肉牛新品種遺傳多樣性的資源價值、制定合理可行的保種方案提供分子水平的遺傳學依據，這同時也為今后的分子遺傳標記育種實驗提供了理論指導。對于CoQ₁₀的研究在其他大型哺乳動物方面還甚少，本研究首次以布萊凱特黑牛為試驗對象，研究CoQ₁₀合成過程中關鍵酶基因PDSS1，目的是對布萊凱特黑牛PDSS1基因的單核苷酸多態性進行檢測，并進行群體遺傳學分析，為進一步研究該基因與布萊凱特黑牛胴體內CoQ₁₀含量、肉質性狀的相關性及基因定位奠定理論基礎，從而促進新品種的培育。

單核苷酸多態性（SNP）是指基因組DNA中某一特定核苷酸位置上發生轉換、顛換、插入或缺失等變化。單核苷酸多態性具有數量多、分布廣和穩定遺傳等特點，是一種進行分子遺傳育種的優良手段。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，尋找到與布萊凱特黑牛肉質性狀相關的SNP，為其分子標記育種奠定基礎。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性序列，是在布萊凱特黑牛PDSS1基因第4外顯子第122位為A或G的堿基多態性序列。

布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法包括以下步驟：

以包含PDSS1基因的待測布萊凱特黑牛全基因組DNA序列為模板，以引物對P為引物，PCR擴增布萊凱特黑牛PDSS1基因第4外顯子；對PCR產物進行SSCP檢測并對基因分型；對基因分型的純合子測序得到布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性序列。

所述的引物對P為：

上游引物：5’-CGTTTTGTGTAGTTATGCCA-3’

下游引物：5’-TGCTGAAGTTGCTCTCCC-3’