[發明專利]布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性及其檢測方法有效
| 申請號： | 201310102404.7 | 申請日： | 2013-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN103243094A | 公開（公告）日： | 2013-08-14 |
| 發明（設計）人： | 董雅娟;楊莉 | 申請（專利權）人： | 董雅娟 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 青島發思特專利商標代理有限公司 37212 | 代理人： | 耿霞 |
| 地址： | 256300 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 布萊凱特黑牛 pdss1 基因 核苷酸 多態性 及其 檢測 方法 | ||
1.一種布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性序列，其特征在于，所述序列是布萊凱特黑牛PDSS1基因第4外顯子第122位為A或G的堿基多態性序列。?
2.一種布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：?
以包含PDSS1基因的待測布萊凱特黑牛全基因組DNA序列為模板，以引物對P為引物，PCR擴增布萊凱特黑牛PDSS1基因第4外顯子；對PCR產物進行SSCP檢測并對基因分型；對基因分型的純合子測序得到布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性序列。
3.根據權利要求2所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述的引物對P為：?
上游引物：5’-CGTTTTGTGTAGTTATGCCA-3’?
下游引物：5’-TGCTGAAGTTGCTCTCCC-3’?。
4.根據權利要求2所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述PCR反應體系為：10×PCR?Buffer2μL，25mM的MgCl22μL，2.5mM的dNTP?Mixture2μL，10uM的上、下游引物各0.4μL，5U/μL的Taq?DNA聚合酶0.2μL，50ng/μL的基因組DNA1μL，ddH2O12μL，總計20μL。?
5.根據權利要求2所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，59℃退火30s，72℃延伸1min，30個循環；72℃延伸10min。?
6.根據權利要求2所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述SSCP檢測應用5%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進行檢測。?
7.根據權利要求2所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性序列及檢測方法還可以包括對多態性位點基因型頻率、等位基因頻率和遺傳多樣性指標的檢測。?
8.根據權利要求7所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述的遺傳多樣性指標為雜合度He、有效等位基因數Ne和多態信息含量PIC。?
9.根據權利要求2所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性序列及檢測方法還可以包括PDSS1基因第4外顯子變異前后對聚十異戊二烯焦磷酸合成酶亞基蛋白質二級結構的分析。?
10.根據權利要求9所述的布萊凱特黑牛PDSS1基因單核苷酸多態性的檢測方法，其特征在于，所述蛋白質二級結構的分析采用Garnier-Roboson分析法。?
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