[發明專利]一種準確區分辣椒與甜椒的功能標記及其檢測引物組和檢測方法

無效

• 申請號: 201310102225.3
• 申請日: 2013-03-27
• 公開（公告）號: CN103173444A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 徐曉美;李穎;王恒明;徐小萬;黃智文;田永紅
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院蔬菜研究所;廣東科農蔬菜種業有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 張海文

1.一種準確區分辣椒與甜椒的功能標記，其位于辣椒Pun1基因（SEQ?ID?NO.1）上的第27bp～2587bp。

2.一種準確區分辣椒與甜椒的PCR引物組，包括如下3條引物：

F1：GCCATCAGTGTATGCTTT（SEQ?ID?NO.2）；

F2：CATACCGCTCCACGGAAAAGAC（SEQ?ID?NO.3）；

R：CGTAAACTTCCGTTGTAAT（SEQ?ID?NO.4）。

3.一種準確區分辣椒與甜椒的PCR試劑盒，其含有權利要求2所示的引物組。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有10×PCR?buffer，dNTPs和Taq酶。

5.一種準確區分辣椒與甜椒的方法，包括如下步驟：

1）提取植株基因組DNA；

2）以植株基因組DNA為模板，利用3條功能標記引物進行PCR擴增，3條引物分別為：

F1：GCCATCAGTGTATGCTTT（SEQ?ID?NO.2），

F2：CATACCGCTCCACGGAAAAGAC（SEQ?ID?NO.3），

R：CGTAAACTTCCGTTGTAAT（SEQ?ID?NO.4）；

3）將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳分離，觀察擴增結果：如果PCR產物只有長1363bp的單一條帶，則該植株為辣椒；如果只有長1171bp的單一條帶，則該植株為甜椒；而如果同時具有這兩條帶，則該植株為辣椒與甜椒的雜合植株。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1）是采用CTAB法提取植株葉片的基因組DNA。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2）中PCR體系為20?μL，包括2?μL?10×PCR?buffer，1.5?μL濃度為2.5?mM?的dNTPs，濃度為10?μM的引物F1、引物F2和引物R各1?μL，1?μL濃度為40?ng/μL的模板DNA，Taq酶1?U，加水定容到20?μL。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2）中PCR反應程序為：94℃預變性5?min；94℃變性30?s，57℃退火1?min，72℃延伸90?s，5個循環；?94℃變性30?s，62℃退火1?min，72℃延伸90?s，5個循環；?94℃變性30?s，60℃退火1?min，72℃延伸90?s，25個循環；72℃延伸10?min。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3）所述電泳分離所用瓊脂糖凝膠濃度為1%，電壓為4-5V/cm，時間為1?h。